1. Gromadzenie i wybór wspomnień, obrazowanie zadania oraz protokół eksperymentalny
Zbieranie emocjonalnych AM
- Wspomnienia osobiste są przywoływane od każdego uczestnika podczas wywiadu przeprowadzonego przed sesją fMRI, w sposób podobny do procedury stosowanej w przypadku nieemocjonalnych AM (np. 11, 12). W przeciwieństwie do większości wcześniejszych technik, nasz AMQ został skonstruowany specjalnie w celu oceny emocjonalnych epizodów osobistych oraz ich właściwości przypominających. Powszechnie stosowana w badaniach behawioralnych i zaadaptowana do badań neuroobrazowych metoda opiera się na technice Crovitza i Schiffmana 13-15, w której badani przypominają sobie konkretne, osobiście doświadczone zdarzenia w odpowiedzi na słowa-klucze. W badaniach fMRI wykorzystywano również paradygmat fotograficzny, aby badać AM w bardziej kontrolowanych warunkach 16, 17. Techniki te zazwyczaj nie są jednak ukierunkowane na badanie komponentu emocjonalnego AM, które są dopasowane pod kątem jakości przypominania.
- Nasz AMQ składa się z listy 115 werbalnych wskazówek dotyczących odrębnych zdarzeń życiowych (np. narodziny członka rodziny, śmierć krewnego), co stanowi kombinację i rozszerzenie list używanych przez innych autorów 18, 19. Dla każdej wskazówki uczestnicy są proszeni o przypomnienie sobie unikalnego epizodu ze swojego życia, który miał miejsce w konkretnym miejscu i czasie (np. jeden konkretny mecz koszykówki, w którym brali udział), zamiast przypominania sobie zdarzeń ogólnych lub powtarzających się (np. grania w koszykówkę w szkole średniej). Co ważne, wspomnieniaom musi towarzyszyć poczucie osobistego zaangażowania, a nie fakt usłyszenia o nich od innych osób.
- Po przywołaniu wspomnienia uczestnicy są proszeni o podanie krótkiego opisu tego zdarzenia (patrz Rysunek 1), który zostanie następnie wykorzystany jako spersonalizowana wskazówka pamięciowa podczas skanowania fMRI (uczestnicy nie wiedzą o konkretnym celu wywiadu poprzedzającego skanowanie).
- Każde wspomnienie jest również datowane i oceniane na sześciu skalach Likerta 20, 21 w celu oceny jego właściwości fenomenologicznych (patrz Rysunek 1). Nasze skale obejmowały walencję emocjonalną (z użyciem skali 7-stopniowej: -3 = bardzo negatywna, 0 = neutralna, +3 = bardzo pozytywna), intensywność emocjonalną, znaczenie osobiste, ilość szczegółów kontekstowych, ilość szczegółów wizualno-percepcyjnych (tj. żywość) oraz częstotliwość przywoływania (wszystkie te ostatnie z użyciem skali 7-stopniowej: 1 = wcale, 7 = w ogromnym stopniu).

Rysunek 1. Ilustracja przeprowadzania AMQ. Dla każdego wskazówki uczestnicy przypominają sobie i krótko opisują konkretne zdarzenie, a następnie określają jego datę i oceniają je w 6 skalach.
Wybór wysoce emocjonalnych AM
- Następnie dla każdego uczestnika wybieranych jest 40 najbardziej emocjonalnych wspomnień (20 pozytywnych i 20 negatywnych) na podstawie ocen podanych w AMQ (tj. ocenionych odpowiednio na 2 lub 3 oraz -2 lub -3). Następnie pozytywne i negatywne AM są dopasowywane pod kątem wieku oraz właściwości fenomenologicznych, aby upewnić się, że wszelkie różnice w aktywności mózgu podczas przypominania nie wynikają z różnic w tych podstawowych właściwościach.
- W razie potrzeby opisy wybranych wskazówek pamięciowych są lekko dostosowywane, aby w jak największym stopniu zrównać ich długość i złożoność gramatyczną; zaleca się również wybór kilku dodatkowych wspomnień do celów treningowych.
Zadanie fMRI
- Zadanie fMRI zostało zaprojektowane w celu umożliwienia porównania zadania AM z kontrolnym zadaniem pamięci semantycznej (SM); próby przywoływania w zadaniach AM i SM mają podobną ogólną strukturę (patrz Figura 2A). Do prezentacji bodźców w skanerze MR wykorzystaliśmy oprogramowanie CIGAL (http://www.nitrc.org/projects/cigal/), jednak można użyć również innego oprogramowania do prezentacji bodźców.
- Zadanie AM opiera się na spersonalizowanych wskazówkach zebranych przed skanowaniem. Każda próba rozpoczyna się od wskazówki wyzwalającej wspomnienie AM, co uczestnik sygnalizuje naciśnięciem przycisku. Następnie uczestnicy kontynuują przypominanie sobie szczegółów zdarzenia, aż do ponownego otrzymania sygnału do oceny przywołanego wspomnienia (Figura 2B).
- Zadanie SM polega na generowaniu przykładów z różnych kategorii semantycznych (np. instrumenty muzyczne, sporty), co podobnie jak w przypadku przywoływania AM, wiąże się z przeszukiwaniem pamięci i wydłużonym czasem przywoływania 22 (Figura 2B). Po podaniu wskazówki kategorii semantycznej uczestnicy naciskają przycisk w momencie rozpoczęcia przywoływania przykładów z danej kategorii, a następnie kontynuują przywoływanie aż do ponownego otrzymania sygnału do oceny pamięci.


Rycina 2. Struktura prób fMRI. A. Ogólna struktura prób. B. Szczegółowa struktura prób AM i SM.
- Oprócz podstawowego porównania prób AM i SM można zastosować również inne manipulacje. Na przykład można manipulować zakresem uwagi podczas przywoływania AM, instruując uczestników, aby zwrócili uwagę na emocjonalne lub nieemocjonalne aspekty zapamiętanych zdarzeń (Rysunek 2B). Manipulacja ta pozwala zbadać, w jaki sposób kierunek uwagi podczas przywoływania może wpływać na doświadczanie AM oraz jakie zmiany zachodzą w powiązanych z tym korelatach neuronalnych.
- Po każdej próbie AM lub SM wyświetlane są ekrany oceny w zrównoważonej kolejności, z wykorzystaniem 5-stopniowych skal Likerta (patrz Rysunek 2B).
- Eksperyment jest podzielony na serie/bloki prób, aby umożliwić uczestnikom odpoczynek oraz uniknąć utraty danych w przypadku awarii sprzętu. Kolejność serii jest zrównoważona pomiędzy uczestnikami. Każda seria rozpoczyna się od sześciosekundowej fiksacji, aby umożliwić stabilizację sygnału MR. Warunki AM i SM są prezentowane w losowej kolejności, oddzielone interwałem międzypróbowym o zmiennym czasie trwania (5-9 sec, średnio = 7sec.).
2. Przygotowanie obiektu do skanowania
Wszyscy uczestnicy przed rozpoczęciem protokołu eksperymentalnego, zatwierdzonego przez Komisję Etyczną, przekazują pisemną świadomą zgodę. Zazwyczaj, aby uniknąć zmiennych zakłócających w lateralizacji aktywacji mózgu, do badania wybierani są uczestnicy praworęczni.
Przed wejściem do pomieszczenia skanowania
- W dniu skanowania oceniany jest aktualny stan afektywny uczestników 23, aby kontrolować wpływ nastroju na przypominanie sobie emocjonalnych AM. Wraz z ocenami po skanowaniu, te wstępne ewaluacje mogą być również wykorzystane do przesiewowego badania zmian nastroju wynikających z udziału w badaniu oraz jako współzmienne w analizach fMRI w celu zbadania aktywacji mózgu pod wpływem aktualnych stanów. Podobnie można przeprowadzić oceny cech osobowości (np. neurotyczności), aby zbadać ich możliwe oddziaływania na zadanie AM 24 oraz powiązane z nimi korelaty neuronalne.
- Przed skanowaniem uczestnicy są szczegółowo informowani o procedurach obrazowania i otrzymują konkretne instrukcje dotyczące zadania behawioralnego. Uczestnicy przechodzą również krótką sesję treningową, aby zapoznać się z zadaniem.
Wejście do pomieszczenia skanowania
- Uczestnicy otrzymują instrukcję, aby położyć się na plecach na stole do skanowania; zapewniane są im dodatkowe podkładki pod głowę, aby zagwarantować komfort podczas badania i zminimalizować ruchy. W celu dalszego ograniczenia ruchów głowy, wokół czoła badanego można lekko owinąć fragment taśmy stroną nieprzylepną. Badanym przekazuje się ochronniki słuchu oraz słuchawki izolacyjne do komunikacji z eksperymentatorem podczas skanowania MRI.
- Prawą dłoń badanego umieszcza się w wygodnej pozycji na panelu odpowiedzi, co pozwala na wykorzystanie lewej dłoni do podparcia lub do innych pomiarów (np. reakcji przewodnictwa skóry). W pobliżu umieszcza się przycisk awaryjnego zatrzymania, aby badany mógł zasygnalizować pilną potrzebę przerwania skanowania.
- Przed rozpoczęciem zbierania danych kluczowe jest upewnienie się, że badani wyraźnie widzą projekcję ekranu z prezentowanymi bodźcami oraz że przyciski odpowiedzi działają prawidłowo.
3. Rejestracja i przetwarzanie danych
Parametry skanowania
Dane MRI zebrano przy użyciu skanera 1.5 Tesla Siemens Sonata. Obrazy anatomiczne stanowiły 3D MPRAGE serie anatomiczne (czas repetycji (TR) = 1600 ms, czas echa (TE) = 3.82 ms; liczba przekrojów = 112; rozmiar woksela = 1x1x1 mm), a obrazy funkcjonalne były seriami 28 przekrojów funkcjonalnych, pozyskanych osiowo przy użyciu sekwencji echoplanarnej (TR = 2000 ms; TE = 40 ms; pole widzenia FOV = 256x256 mm; rozmiar woksela = 4x4x4 mm), co pozwoliło na pełne pokrycie obszaru mózgu.
Analiza danych
Wykorzystaliśmy Statistical Parametric Mapping (SPM: http://www.fil.ion.ucl.ac.uk/spm) w połączeniu z własnymi narzędziami opartymi na środowisku Matlab. Przetwarzanie wstępne obejmowało typowe etapy: kontrolę jakości, wyrównanie TR, korekcję ruchu, korejestrację, normalizację oraz wygładzanie (jądro 8 mm3). Analizy statystyczne na poziomie indywidualnym i grupowym mogą obejmować porównania aktywności mózgu w zależności od typu pamięci (AM vs. SM), walencji emocjonalnej (pozytywna vs. negatywna) oraz punktu ciężkości wydobywania informacji (treść emocjonalna vs. nieemocjonalna).
4. Reprezentatywne wyniki

Rysunek 3. Korelaty neuronalne przywoływania AM. W ramach walidacji niniejszego protokołu, przywoływanie AM wywołało zwiększoną aktywność w sieci przywoływania AM 4, 25, obejmującej obszary hipokampa (a), zaangażowane w ogólne przywoływanie pamięci, przyśrodkową korę przedczołową (b), powiązaną z osobistym zaangażowaniem, obszary klin i przedklin oraz złącze ciemieniowo-potyliczne (odpowiednio c, e), związane z przetwarzaniem reprezentacji wizualno-przestrzennych, oraz złącze czołowo-skroniowe (d), zaangażowane w afektywne przywoływanie AM; podobne efekty w przypadku tego ostatniego zaobserwowano również w ciele migdałowatym (nie pokazano). „Mapy aktywacji” są nałożone na obrazy mózgu o wysokiej rozdzielczości przedstawione w przekrojach wieńcowym (lewy panel) oraz strzałkowym (środkowy i prawy panel); paski kolorów wskazują gradient wartości t map aktywacji (p < 0.005, 10 sąsiednich wokseli 26), odzwierciedlający aktywność mózgu zsynchronizowaną czasowo z wystąpieniem wskazówek pamięciowych. Wykresy liniowe ilustrują przebieg czasowy sygnału fMRI (% zmiany sygnału) dla każdego typu próby i TR (1 TR = 2 seconds). L = lewa; R = prawa.