$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Szczepy bakteryjne
NUTA: W tym eksperymencie wykorzystano dziewięć standardowych szczepów, w tym Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1, Proteus vuigaris i Klebsiella pneumoniae. Salmonella paratyphi (Salmonella paratyphi ) A, Fusobacterium nucleatum, Pseudomonas aeruginosa i Proteus vuigaris mogą wytwarzaćH2S.
- Przygotowanie kultury bakteryjnej
- Przenieść jedną kolonię bakteryjną Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1 i Klebsiella pneumoniae z płytki agarowej Luria-Bertani (LB) do 100 ml pożywki LB i hodować w temperaturze 37 °C przez 12-16 godzin, aż stężenie bakterii wyniesie około 1 x 109 komórek/ml (jak wskazano przez OD600 = 1).
- Przenieść jedną kolonię bakteryjną Fusobacterium nucleatum i Proteus vuigaris z płytek agarowych bulionu sojowego z tryptykazą (TSB) do 100 ml pożywki TSB i hodować w temperaturze 37 °C beztlenowo przez 24 godziny, aż stężenie bakterii wyniesie około 1 x 109 komórek/ml (jak wskazuje OD600 = 1).
2. Test wykrywaniaH2S
- Test produkcji siarkowodoru
- Zmieszać 100 μl kultury bakteryjnej ze 100 μl nowo przygotowanego roztworu bizmutu (pH 8,0; 10 mM chlorku bizmutu (III), 0,4 M trietanoloamino-HCl, 20 mM jednowodnego 5-fosforanu pirydoksalu, 20 mM EDTA (kwas etylenodiaminotetraoctowy) i 40 mM L-cysteiny) w 96-dołkowych płytkach do mikromiareczkowania i hodowli przez 20 minut w temperaturze 37 °C. Dla każdego szczepu bakteryjnego należy przeprowadzić analizę w trzech egzemplarzach.
- Po 20 minutach sprawdź, czy kolor się zmienił. Jeśli kolor roztworu zmieni się z jasnożółtego na, oznacza to, że bakterie są w stanie wytworzyćH2S. Powtórz ten pomiar 3x.
- Czułość metody
- Określić czułość metody przy użyciu różnych stężeń wodorosiarczku sodu (NaHS): 2 mM, 1 mM, 0,8 mM, 0,6 mM, 0,4 mM, 0,2 mM, 0,1 mM i 0 mM, zmieszanych z roztworem BS (siarczku bizmutu).
- Określić obecność HS−/S2− , obserwując tworzenie się czarnego osadu BS. Oceń kolor studni za pomocą skali wizualnej od braku produkcji koloru (-) do produkcji najciemniejszego czarnego koloru (++++++).