Czuła metoda wizualna do wykrywania bakterii wytwarzających siarkowodór

Streszczenie

Źródło: Zhu, W., & Chu, W. Czuła metoda wizualna do wykrywania bakterii wytwarzających siarkowodór. J. Vis. Exp. (2022)

Ten film przedstawia czułą metodę wizualną do szybkiego wykrywania bakterii wytwarzających siarkowodór. Zmiana koloru z żółtego na wskazuje na aktywność bakterii poprzez tworzenie się siarczku bizmutu.

Protokół

1. Szczepy bakteryjne

NUTA: W tym eksperymencie wykorzystano dziewięć standardowych szczepów, w tym Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1, Proteus vuigaris i Klebsiella pneumoniae. Salmonella paratyphi (Salmonella paratyphi ) A, Fusobacterium nucleatum, Pseudomonas aeruginosa i Proteus vuigaris mogą wytwarzać_H2S.

1. Przygotowanie kultury bakteryjnej
   1. Przenieść jedną kolonię bakteryjną Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1 i Klebsiella pneumoniae z płytki agarowej Luria-Bertani (LB) do 100 ml pożywki LB i hodować w temperaturze 37 °C przez 12-16 godzin, aż stężenie bakterii wyniesie około 1 x 10⁹ komórek/ml (jak wskazano przez OD₆₀₀ = 1).
   2. Przenieść jedną kolonię bakteryjną Fusobacterium nucleatum i Proteus vuigaris z płytek agarowych bulionu sojowego z tryptykazą (TSB) do 100 ml pożywki TSB i hodować w temperaturze 37 °C beztlenowo przez 24 godziny, aż stężenie bakterii wyniesie około 1 x 10⁹ komórek/ml (jak wskazuje OD₆₀₀ = 1).

2. Test wykrywania_H2S

1. Test produkcji siarkowodoru
   1. Zmieszać 100 μl kultury bakteryjnej ze 100 μl nowo przygotowanego roztworu bizmutu (pH 8,0; 10 mM chlorku bizmutu (III), 0,4 M trietanoloamino-HCl, 20 mM jednowodnego 5-fosforanu pirydoksalu, 20 mM EDTA (kwas etylenodiaminotetraoctowy) i 40 mM L-cysteiny) w 96-dołkowych płytkach do mikromiareczkowania i hodowli przez 20 minut w temperaturze 37 °C. Dla każdego szczepu bakteryjnego należy przeprowadzić analizę w trzech egzemplarzach.
   2. Po 20 minutach sprawdź, czy kolor się zmienił. Jeśli kolor roztworu zmieni się z jasnożółtego na, oznacza to, że bakterie są w stanie wytworzyć_H2S. Powtórz ten pomiar 3x.
2. Czułość metody
   1. Określić czułość metody przy użyciu różnych stężeń wodorosiarczku sodu (NaHS): 2 mM, 1 mM, 0,8 mM, 0,6 mM, 0,4 mM, 0,2 mM, 0,1 mM i 0 mM, zmieszanych z roztworem BS (siarczku bizmutu).
   2. Określić obecność HS⁻/S²⁻ , obserwując tworzenie się czarnego osadu BS. Oceń kolor studni za pomocą skali wizualnej od braku produkcji koloru (-) do produkcji najciemniejszego czarnego koloru (++++++).

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Chlorek bizmutu (III)	Szanghaj Macklin Biochemical Co., Ltd	7787-60-2
EDTA	Nanjing Chemical Reagent Co., Ltd	60-00-4
Fusobacterium nucleatum (Fusobacterium nucleatum)	Kontroler ATCC (Kontroler T	25586
L-cysteina	Amresco (angielski)	52-90-4
Trietanoloamina-HCl	Szanghaj Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.	637-39-8
Wodorosiarczek sodu
Pipeta