Ten film przedstawia fluorescencyjne obrazowanie poklatkowe całego cyklu życia bakterii Streptomyces venezuelae przy użyciu urządzenia mikroprzepływowego do wizualizacji kiełkowania, wzrostu strzępek i zarodnikowania w czasie rzeczywistym.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Fluorescencyjne obrazowanie poklatkowe cyklu życiowego Streptomyces venezuelae
652 wyświetleń
⸱
26 września 2025
W tym artykule
Streszczenie
Protokół
1. Konfiguracja mikroskopu i protokołu poklatkowego
Nuta: Metodę tę zastosowano na w pełni zmotoryzowanym i zautomatyzowanym mikroskopie szerokokątnym z napędem silnikowym, wyposażonym w kamerę sCMOS, lampę metalohalogenkową, sprzętowy autofokus, uchwyt stolika na płytki 96-dołkowe oraz komorę środowiskową.
- Wcześniej podgrzej komorę środowiskową do 30 °C, aby zapobiec problemom z autofokusem po rozpoczęciu eksperymentu. Wymagany czas zależy od zastosowanej komory środowiskowej, mikroskopu i systemu grzewczego. Rozpocznij podgrzewanie systemu w noc poprzedzającą eksperyment.
- Włącz mikroskop i oprogramowanie do automatyzacji i stero....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| B04A CellAsic ONIX płytka do komórek bakteryjnych | Merck-Millipore | Zobacz materiał B04A-03-5PK | Płytki do hodowli mikroprzepływowych |
| System perfuzji mikroprzepływowej CellAsic ONIX i ONIX FG (wersja 5.0.2) | Merck-Millipore | EV-262 | Najnowszą wersję ONIX (lipiec 2015) oraz instrukcję korzystania z programu można znaleźć tutaj: http://www.merckmillipore.com |
| Mikroskop Axio Observer.Z1 | Zeiss | 431007-9902-000 | W pełni zautomatyzowany i zmotoryzowany odwrócony mikroskop szerokokątny |
| Inkubator XL multi S1 z modułem temperatury S1 i grzałką XL S2 | Zeiss | 411857-9061-000 | Komora środowiskowa otaczająca mikroskop |
| Obiektyw Plan-Apochromat 100x/1.46 Oil DIC | Zeiss | 420792-9800-000 | |
| Ocra FLASH 4 V2 | Hamamatsu Photonics K.K. | Zobacz materiał C11440-22CU | |
| Oświetlacz HXP 120V | Zeiss | 423013-9010-000 | |
| Zestaw filtrów FL 46 HE YFP bez przesuwu | Zeiss | 489046-9901-000 | Zestaw filtrów fluorescencyjnych, wzbudzenie 500/25 nm, emisja 535/30 nm |
| Zestaw filtrów FL 63 HE RFP bez przesuwu | Zeiss | 489063-0000-000 | Zestaw filtrów fluorescencyjnych, wzbudzenie 572/25 nm, emisja 629/30 nm |
| Ramka montażowa K-M do płytek wielodołkowych | Zeiss | 000000-1272-644 | Uchwyt stolika do płytki mikroprzepływowej |
| ZEN pro 2012 | Zeiss | 410135-1002-120 | Oprogramowanie sterujące mikroskopem |
| Moduł ZEN Upływ czasu | Zeiss | 410136-1031-110 | Moduł oprogramowania do ustawiania eksperymentów z mikroskopią poklatkową |
| Kafelki/pozycje modułu ZEN | Zeiss | 410136-1025-110 | Moduł oprogramowania do zapisywania określonych pozycji scenicznych (xzy) |
| Fidżi | Pakiet oprogramowania typu open source | http://fiji.sc/Fiji | Generowanie filmów poklatkowych |
| PBS (sól fizjologiczna buforowana fosforanami) | Sigma | P4417-100TAB | Służy do napełniania studni wlotowych nieużywanych torów w płytkach B04A w celu przygotowania płytki do krótkotrwałego przechowywania. |
| Zobacz materiał SV60 | Kolekcja szczepów John Innes Centre | Szczep S. venezuelae wykazujący ekspresję divIVA-mcherry i ftsZ-ypet |
