Indukcja różnicowania Vibrio parahaemolyticus w komórki roju

Streszczenie

Źródło: Heering, J., et al. Indukcja różnicowania komórkowego i obrazowanie pojedynczych komórek Vibrio parahaemolyticus Swimmer i Swarmer cells. J. Vis. Exp. (2017)

Ten film pokazuje indukcję różnicowania komórek roju u Vibrio parahaemolyticus przy użyciu specjalnie przygotowanego podłoża agarowego. Manipulując sygnałami środowiskowymi, takimi jak wyczerpanie żelaza, suplementacja wapnia i kontakt powierzchniowy, bakterie są stymulowane do przejścia z formy pływaka w wydłużone komórki roju z bocznymi wiciami. Te zróżnicowane komórki rozprzestrzeniają się po powierzchni ciała stałego, tworząc charakterystyczne rozbłyski roju, które oznaczają udaną zmianę morfologiczną.

Protokół

1. Indukcja różnicowania komórek roju

NUTA: Poniższe kroki opisują, jak indukować różnicowanie V. parahaemolyticus w cyklu życiowym komórki roju i jak stymulować proliferację na powierzchniach stałych.

1. Zawiesić 4 g agaru do infuzji serca (HI) w 100 ml ddH₂O w celu przygotowania płytek rojowych.

2. Ostrożnie zagotuj roztwór agaru HI w kuchence mikrofalowej i od czasu do czasu potrząsaj butelką, aż proszek się rozpuści. Autoklaw w temperaturze 121 °C przez 20 min.

3. Po autoklawowaniu schłodzić agar HI do tempe....

Wyniki

Rysunek 1: Indukcja różnicowania roju i przygotowanie komórek do obrazowania mikroskopowego. Uproszczona wizualizacja procesu produkcji komórek roju V. parahaemolyticus oraz przygotowanie preparatów mikroskopowych do .......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Komponenty multimedialne
LB średni	Roth	Zobacz materiał X968.3
Agar Difco, granulowany	BD	214510	Do przygotowania agaru LB z podłożem LB
Agar do naparu serca Difco	BD	244400	Do przygotowania płytek rojowych HI agar
Agaroza NEEO, ultra jakość	Roth	2267.3	Do przygotowania mikroskopowych padów agarozowych
Dodatków
2,2'-bipirydyl	Sigma Aldrich	D216305-25G	Do przygotowania płytek rojowych HI agar
Chlorek wapnia dwuwodny	Roth	5239.1	Do przygotowania płytek rojowych HI agar
Sprzęt
szalka Petriego 150 mm x 20 mm z krzywkami	Sarstedt powiedział:	82.1184.500	Do przygotowania płytek rojowych HI agar
kelvitron T (B 6420)	Heraeus (Heraeus)	-	Służy do suszenia płytek rojowych HI agar