Ten film przedstawia opartą na kulturze metodę identyfikacji gatunków Vibrio , podkreślając agar chromogenny jako dokładniejszą alternatywę dla powszechnie stosowanego agaru tiosiarczanowo-cytrynianowo-żółciowego-sacharozy lub TCBS. Agar chromogenny zapewnia doskonałe różnicowanie szczepów Vibrio poprzez wykrywanie aktywności enzymatycznej specyficznej dla gatunku.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Nowa pożywka chromogeniczna do szybkiego wykrywania gatunków Vibrio
778 wyświetleń
⸱
26 września 2025
W tym artykule
Streszczenie
Protokół
Wzrost na podłożach selektywnych i różnicowych
- Dwa do czterech dni przed eksperymentem należy umieścić wszystkie szczepy drobnoustrojów na nieselektywnym podłożu (TSAS, BHI lub agar czekoladowy) w celu izolacji kolonii. Inkubować płytki w temperaturze 35-37 °C przez 48 godzin. Sprawdź czystość kultur, obserwując morfologię kolonii po inkubacji. Czyste kultury powinny dawać kolonie, które wykazują podobną morfologię kolonii.
- Przenieś kilka izolowanych kolonii do 5 ml bulionu. Inkubować probówki w temperaturze 35-37 °C przez 16-24 godziny.
NUTA: We wszystkich eksperymentach wykorzystaj młode kolonie, które mają mniej niż cztery dni, do przygotowania kultur nocnych.
- Umieść pętlę nocnych kultur na pożywkach selektywnych i różnicowych (TCBS i agar chromogenny) w celu izolacji kolonii. Inkubować płytki w temperaturze 35-37 °C przez maksymalnie 96 godzin.
- Rejestruj ogólny wzrost wszystkich szczepów, badając zarówno gęstość kultur na płytce, jak i wielkość izolowanych kolonii. Zapisz kolor kolonii w świetle otoczenia i/lub UV. Zwróć uwagę na inne cechy izolowanej kolonii, takie jak wysokość, margines i forma.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Odczynnik/Sprzęt | |||
| Agar | Fisher Naukowy | DF0140-15-4 | może korzystać z innych marek |
| BHI w proszku | Fisher Naukowy | DF0418-17-7 | może korzystać z innych marek |
| Generator gazu CampyGen | Odporna diagnostyka | CN035A | zapewnienie atmosfery mikroaerofilnej; może korzystać z innych marek |
| Czekoladowe talerze agarowe | Odporna diagnostyka | E14 | może korzystać z innych marek |
| Probówki hodowlane | Fisher Naukowy | Numer katalogowy S50712 powiedział: | może korzystać z innych marek |
| Płytki agarowe HardyChrom Vibrio | Odporna diagnostyka | Zobacz materiał G319 | Niniejsze badanie ocenia to podłoże |
| Inkubator | Jakikolwiek | ||
| Pętle inokulacyjne | Fisher Naukowy | 22-363-606 | W tym badaniu użyto rozmiaru 10 mikrolitrów |
| szalka Petriego | Fisher Naukowy | FB0875713 | może korzystać z innych marek |
| Pipeta i końcówki | Wszelkie wysterylizowane końcówki | ||
| TCBS w proszku | Odporna diagnostyka | 265020 | Niniejsze badanie ocenia to podłoże |
| TSB w proszku | Fisher Naukowy | DF0370-07-5 | może korzystać z innych marek |
| Szafka obserwacyjna UV | Jakikolwiek | Emituj długofalowe światło UV | |
| Kąpiel wodna | Jakikolwiek | ||
| Gatunki i szczepy bakterii | |||
| Aeromonas hydrophila (Aeromonas hydrophila) | Kontroler ATCC (Kontroler T | ||
| Candida albicans (Candida albicans) | Kontroler ATCC (Kontroler T | ||
| Campylobacter jejuni | Kontroler ATCC (Kontroler T | ||
| Escherichia coli (Escherichia coli) | Kontroler ATCC (Kontroler T | ||
| Proteus mirabilis (Proteus mirabilis) | Kontroler ATCC (Kontroler T | ||
| Pseudomonas aeruginosa | Kontroler ATCC (Kontroler T | ||
| Staphylococcus aureus (gronkowiec złocisty) | Kontroler ATCC (Kontroler T | ||
| Salmonella Choleraesuis | Kontroler ATCC (Kontroler T | ||
| Shigella boydii (Shigella boydii) | Kontroler ATCC (Kontroler T | ||
| Shigella flexneri | Kontroler ATCC (Kontroler T | ||
| Shigella sonnei (Shigella sonnei) | Kontroler ATCC (Kontroler T | ||
| Vibrio alginolyticus (Vibrio alginolyticus) | Kontroler ATCC (Kontroler T | ||
| V. cholerae (serotypy obejmują Biowary O139, O1, non O1, El Tor) | Amerykańska Agencja ds. Żywności i Leków (FDA), ATCC (T | ||
| V. damsela | FDA | ||
| V. fisheri | Środowisko | ||
| V. fluvialis (V. fluvialis) | CDC | Centrum Kontroli Chorób | ||
| V. furnissii | CDC | Centrum Kontroli Chorób | ||
| V. hollisae (V. hollisae) | FDA | ||
| V. metschnikovii powiedział: | Kontroler ATCC (Kontroler T | ||
| V. mimicus | FDA | ||
| V. parahaemolyticus (serotypy obejmują O3:K6, O1:K56, O4:K8, O5:K15, O8 itp.) | ATCC, FDA, CDC, Środowisko | ||
| V. proteolyticus | FDA | ||
| V. vulnificus (V. vulnificus) | FDA |
