Method Article

Ukierunkowana izolacja kolonii bakteryjnych za pomocą degradacji hydrożelu o jasnym wzorze

September 26th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Fattahi, N., et al. Fotodegradowalne interfejsy hydrożelowe do badań przesiewowych, selekcji i izolacji bakterii. J. Vis. Exp. (2021).

Ten film pokazuje ekstrakcję kolonii bakteryjnych z fotodegradowalnego hydrożelu za pomocą światła UV. Wybierana jest określona kolonia, a wzorzysta ekspozycja na światło ma na celu zainicjowanie miejscowej degradacji hydrożelu. Po dostosowaniu natężenia i czasu trwania światła stosuje się światło UV, uwalniając kolonię. Kolonia jest następnie zasysana przez rurki i przenoszona do rurki w celu dalszej analizy.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Szczepy bakteryjne i protokoły hodowli

  1. Smugi kolonii bakterii na płytkach agarowych uzupełnione odpowiednimi pożywkami wzrostowymi. W tym raporcie B. subtilis (szczep 1A1135, Bacillus Genetic Stock Center) jest hodowany na ATGN (0,079 M KH2PO4 (diwodorofosforan potasu), 0,015 M (NH4)2SO4 (siarczan amonu), 0,6 mM MgSO4·7H2O (siedmiowodny siarczan magnezu), 0,06 mM CaCl2·2H2O (dwuwodny chlorek wapnia), 0,0071 mMMnSO 4·H2O (jednowodny siarczan manganu(II)), 0,125 M FeSO4·7H2O (siedmiowodny siarczan żelaza), 28 mM....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
figure-results-1

Rysunek 1: Tworzenie hydrożelu na szkiełkach nakrywkowych ze szkła tiolowanego. (A) Przekładki o grubości 12,7 μm umieszcza się po dwóch przeciwległych stronach szkiełka nakrywkowego zawierającego reaktywne grupy tiolowe. (B) Roztwór prekurs.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
(3-merkaptopropylo)trietoksysilanSigma-AldrichNumer katalogowy: 175617-25G> 95%
Proszek do prania AlconoxPreparat Alconox1104 
Siarczan amonuFisher ChemicznyA702-500Certyfikowany granulat ACS
Autoklaw SK300CNaukowy Yamato18016 
Bacillus subtilis 1A1135Centrum Zasobów Genetycznych BacillusNumer katalogowy 1A1135 
Mikroskop pionowy BrightfieldKorporacja OlympusZobacz materiał BX51 
Chlorek wapnia, bezwodnyFisher ChemicznyZobacz materiał C614-500Do desekatorów peletów, 4-20 mesh
Wirówka 5702Eppendorf powiedział:5702 
Kwas cytrynowy jednowodnySigma-AldrichZobacz materiał C1909-500GOdczynnik ACS, > 99,0%
D-glukoza (dekstroza)VWR Amresco Nauki przyrodnicze0188-1KG 
Baza z elastomeru silikonowego DOWSIL 184Dow Silicones Corporation Temperatura przechowywania: -30-60 °C
DOWSIL 184 utwardzacz z elastomeru silikonowegoDow Silicones Corporation Temperatura przechowywania: < 32 C
Spektrofotometr mikropłytkowy EPOCH2Instrumenty BioTekEPOCH2 powiedział: 
Escherichia coli (Escherichia coli) ATCC 25922 (wersja angielska)Thermo Fisher NaukowyCzynnik R19020 
Etanol bezwodnyFisher Chemiczny459844 
Szkło osłonowe mikroskopu FisherbrandFisher Naukowy12540A 
Szkiełka mikroskopowe premium Fisherfinest gładkieFisher Naukowy12-544-4 
Roztwór nadtlenku wodoruSigma-Aldrich216763-500MLZawiera inhibitor 30% wag. w H2O
Wytrząsarka Incu MiniPunkt odniesieniaE5-0014-01 
IzopropanolSigma-Aldrich190764 
Siarczan magnezu, 7-hydratMacron Chemikalia wysokowartościowe6066-04Avantor Performance Materials, Inc.
MetanolSigma-Aldrich179337-4LOdczynnik ACS, > 99,8%
Spektrofotometr NanoDrop OneThermo ScientificND-ONEC-W 
Azot sprężonyMathesonUN1066 powiedział: 
Tlenowy środek do czyszczenia plazmowegoPlazma HarrickaPDC-001-HP 
Pentaerytrytol tetra(merkaptoetylo) polioksyetylen (4 ramiona-PEG)Korporacja NOF AmericaPTE-100SHSłońce-PTE-100SH
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS), 10XVWR Amresco Nauki przyrodniczeZobacz materiał K813-500MLPrzechowywać w temperaturze od 15 °C do 30 °C
Polidimetylosiloksan (PDMS) Slygard 184Dow Corning4019862 
Wielokąt400 powiedział:Mightex (Potęga)DSI-D-000 
Wysokiej jakości szkiełka mikroskopoweFisher Naukowy12-544-4Wymiary: 25 x 75 x 1 mm
Chlorek soduSigma Nauki przyrodniczeS5886-500GBioodczynnik, odpowiedni do hodowli komórkowej
Wodorotlenek soduSigma-AldrichS8045-500GBioXtra, > 98%, granulat (bezwodny)
Sodu fosforan jednozasadowy dwuwodnySigma-Aldrich71505-250GBioUltra, dla biologii molekularnej, > 99,0% (T)
Grubościomierz ze stali nierdzewnejProdukty marki Precision77739 
Kwas siarkowySigma-Aldrich320501-2.5L 
Toluen, bezwodny, 99,8%Sigma-Aldrich244511-1LBezwodny, > 99,8%
Trichloro(1H,1H,2H,2H perfluorooktylo)silan (TPS), 97%Sigma-AldrichNumer telefonu 448931-10G 
Tryptyczny bulion sojowySigma-Aldrich22092-500GDla mikrobiologii
Ultradźwiękowy sonografFischer NaukowyFS-110H 

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Photodegradable HydrogelBacterial Colony IsolationLight Patterned DegradationUV Light ExposureFluorescence MicroscopyColony AspirationHydrogel DegradationTargeted Colony ExtractionLight Pattern DesignSyringe Aspiration

Related Articles