Test zalewania sadzonek w celu badania przesiewowego odporności bakteryjnej pomidorów

Streszczenie

Źródło: Hassan, J. A., et al. Wysokoprzepustowa identyfikacja oporności na Pseudomonas syringae pv. Pomidor w pomidorze za pomocą testu powodziowego sadzonek. J. Vis. Exp. (2020).

Ten film przedstawia metodę badań przesiewowych pod kątem oporności bakteryjnej w różnych odmianach pomidorów przy użyciu dziesięciodniowych sadzonek zaszczepionych zawiesiną bakteryjną. Wyjaśnia, w jaki sposób bakterie atakują aparaty szparkowe, dostarczają białka efektorowe w celu stłumienia odporności roślin oraz jak różnią się reakcje roślin między szczepami podatnymi i opornymi. Wynik ocenia się, obserwując widoczne różnice we wzroście, przy czym odporne rośliny pozostają zdrowe, a podatne wykazują uszkodzenie tkanek.

Protokół

1. Metoda zalewania sadzonek pomidorów

1. Wyjmij płytki z 10-dniowymi sadzonkami z komory wzrostowej i umieść je w komorze bezpieczeństwa biologicznego, aby przygotować płytki do zalania.
2. Usuń taśmę chirurgiczną z dwóch płytek.
3. Ustaw minutnik na 3 minuty. Odmierzyć 6 ml końcowego inokulum P. syringae pv. pomidor (Pst) (Pst19 OD₆₀₀ = 0,0075 lub PstDC3000 OD₆₀₀ = 0,005) i przenieść 6 ml inokulum na każdą płytkę z 10-dniowymi sadzonkami.
4. Delikatnie wepchnij sadzonki do inokulum za pomocą sterylnej końcówki pipety. Uruchom minutnik.
5. Trzymaj po jednym talerzu w każdej ręce. Przechyl przód płytki w dół, aby zgromadzić inokulum i głównie zanurzyć liścienie i liście sadzonek.
6. Przesuń z boku na bok 5–7 razy, a następnie odchyl płytki do tyłu, aby przykryć korzenie i całą płytkę.
7. Ponownie przechyl płytki w dół, aby zanurzyć liścienie i liście, i powtarzaj w sumie przez 3 minuty.
8. Wylej inokulum z płytek, połóż płytki na płaskiej powierzchni, a następnie odlej resztki inokulum po raz drugi.
9. Owinąć płytki taśmą chirurgiczną i powtórzyć kroki 1.2–1.8 dla pozostałych płytek.
10. Ponownie inkubować płytki w komorze wzrostowej po zalaniu wszystkich płytek.

Fenotyp po 7-10 dniach dla PstDC3000 lub 10-14 dni dla Pst19.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Komora bezpieczeństwa biologicznego, klasa II typ A2
MARKA Jednorazowe kuwety plastikowe, polistyren	VWR Polska	47744-642
Wykałaczki z płaskiego drewna szenilowego Kraft	VWR Polska	500029-808
Szklany palnika alkoholowego	Fisher Naukowy	S41898A / Nie. W-125
Szklane palniki alkoholowe	Fisher Naukowy	S41898 / Nr BO125 powiedział:
Odczynnik ACS do glicerolu	VWR Polska	EMGX0185-5
Kimberly-Clark™ Kimtech Science™ Kimwipes™ Delikatne wycieraczki do zadań	Fisher Naukowy	06-666-A
Chlorek magnezu, klasa ACS	VWR Polska	97061-356
Siarczan magnezu siedmiowodny, klasa ACS	VWR Polska	97062-130
Probówki do mikrowirówek, 1,5 ml
Probówki do mikrowirówek, 2,2 ml
Murashige & Skoog, Sole bazalne	Laboratoria Kesonowe, Inc.	MSP01-50LT
Pipet-Lite XLS LTS 8-kanałowa pipeta 20-200uL	Rainin	L8-200XLS
Pipet-Lite XLS LTS 8-kanałowa pipeta 2-20uL	Rainin	L8-20XLS
Polistyren 100mm x 25mm sterylna szalka Petriego	VWR Polska	89107-632
Polistyren 150mm x 15mm sterylna szalka Petriego	Fisher Naukowy	FB08-757-14
Polistyrenowa 150x15mm sterylna szalka Petriego	Fisher Naukowy	08-757-148
Końcówki LTS 20 μL 960/10 GPS-L10	Rainin	17005091
Końcówki LTS 250 μL 960/10 GPS-L250	Rainin	17005093