$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Przygotuj instrumenty, pożywki hodowlane, roztwory i szalki Petriego
1. Wykałaczki w autoklawie umieść w zlewce o pojemności 50 ml pokrytej folią aluminiową, aby były sterylne.
2. Wysterylizuj wszystkie suche produkty, które będą używane (końcówki, patyczki, szkło itp.) w autoklawie.
NUTA: Ostrożność! Postępuj zgodnie ze wszystkimi wskazówkami bezpieczeństwa dla używanego modelu autoklawu. Autoklawy stwarzają ryzyko wybuchu, oparzeń parą wodną oraz kontaktu z gorącymi powierzchniami, materiałami i mediami.
3. Przygotuj agar MS (mąka sojowa z mannitolu (SFM)) do uprawy kultur.
1. Dodać 5 g mąki sojowej i 5 g agaru do kolby o pojemności 1 l.
2. Rozpuścić 5 g mannitolu w 250 ml wody z kranu i rozlać do kolby zawierającej mąkę sojową i agar.
3. Dodać korek piankowy i folię do otworu kolby i autoklawować w temperaturze 121 °C, 15 psi przez co najmniej 30 minut.
OSTROŻNOŚĆ: To podłoże łatwo kipi. Użyj kolby, która może pomieścić co najmniej czterokrotność rzeczywistej objętości agaru MS poddawanego autoklawizowi. Standardowy szybkowar może być używany zamiast autoklawu z podobnymi względami bezpieczeństwa. Alternatywnie kuchenka mikrofalowa może być używana do sterylizacji mediów i materiałów, jeśli dostęp do autoklawu nie jest możliwy. Nauczyciele szkół średnich mogą również chcieć współpracować z lokalnymi szkołami wyższymi lub uniwersytetami, aby uzyskać dostęp do materiałów sterylizowanych w autoklawie.
4. Schłodź nośnik, aż będzie wystarczająco wygodny, aby można go było obsługiwać. Należy uważać, aby nie schładzać go zbyt długo, ponieważ agar krzepnie w temperaturach poniżej 50 °C.
5. Wlać agar MS z kolby do sterylnych szalek Petriego, aż dno każdej szalki Petriego będzie wypełnione w przybliżeniu do połowy (około 25 ml pożywki na szalkę Petriego). Pozostawić do zestalenia się przed użyciem płytek agarowych. Przechowuj płytki agarowe w plastikowej torbie w temperaturze pokojowej, aż będą potrzebne.
NUTA: Płytki agarowe mogą być również przechowywane w lodówce, zwłaszcza jeśli w pożywce potrzebne są antybiotyki.
2. Rozłóż Streptomyces na płytkach w celu rozmnażania
1. Szczepy Streak Streptomyces na płytkach agarowych MS do pojedynczych kolonii przy użyciu standardowej metody, takiej jak metoda smugowa kwadrantowa.
NUTA: Można użyć pętli do zaszczepiania lub sterylnych wykałaczek. Opcjonalnie: W przypadku gatunków Streptomyces powszechnie stosuje się inne podłoża, takie jak R2YE i pożywki minimalne.
2. Inkubować płytki w temperaturze 30 °C.
3. Zmieniaj płytki, zbierając pojedynczą kolonię co 4–6 dni. Wraz z wiekiem kolonie stają się podatne na losowe mutacje.
3. Porównaj i zapisz wygląd wizualny
1. Zwróć uwagę na morfologię kolonii dla każdego mutanta w porównaniu ze szczepem rodzicielskim typu dzikiego po rozłączeniu wszystkich szczepów, jak w kroku 2. Porównaj nowy izolat z dobrze zbadanym gatunkiem, takim jak S. coelicolor lub S. venezuelae, podczas charakteryzowania nowych gatunków Streptomyces . Zwróć uwagę na cechy charakterystyczne (Ryc. 1), takie jak podstawowy kształt, powierzchnia kolonii (rozmyta, łysa, pomarszczona itp.), nieprzezroczystość, uniesienie i pigmentacja (rozróżnij grzybnię wegetatywną, grzybnię powietrzną i/lub otaczające podłoże).
2. Oznaczyć płytkę agarową MS i rozprowadzić szczepy typu dzikiego i zmutowanego we wzorach klinowych (ryc. 1). Należy uważać, aby żaden szczep nie stykał się z innym szczepem, aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego. Zanotuj datę i godzinę, kiedy szczepy są rozmazywane na talerzu. Inkubować płytki w temperaturze 30 °C.
3. Umieść wyrośnięte szalki Petriego na kolorowym lub białym papierze, aby ujednolicić tło. Napisz na papierze nazwę szczepu, datę, temperaturę inkubacji i czas od pierwszego smugowania płytki. Zrób cyfrowe zdjęcie (zdjęcia) płyty z tymi ostatnimi informacjami zapisanymi na tle papieru, aby zminimalizować zamieszanie.
NUTA: Napis może zostać wycięty ze zdjęcia w późniejszym czasie, jeśli ma być użyty do przygotowania figury.
