Jednokomórkowa hodowla bakterii w gigantycznych pęcherzykach

Streszczenie

Źródło: Morita, M., et al. Hodowla komórek bakteryjnych na poziomie pojedynczej komórki wewnątrz gigantycznych pęcherzyków. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film pokazuje metodę hodowli i obserwacji pojedynczych komórek bakteryjnych zamkniętych w gigantycznych pęcherzykach zakotwiczonych w podpartej dwuwarstwie lipidowej. System umożliwia stabilne, długoterminowe obrazowanie dynamiki wzrostu pojedynczych komórek w ograniczonym, fizjologicznie istotnym mikrośrodowisku.

Protokół

1. Przygotowanie systemu obserwacji pęcherzyków olbrzymich (GV) (System Hodowli Komórek Bakteryjnych)

1. Przygotowanie małych pęcherzyków (SV) do budowy podpartej membrany dwuwarstwowej
   1. Wlać 20 μl roztworu POPC (1-palmitoilo-2-oleoilo-sn-glycero-3-fosfocholiny) i 4 μl roztworu biotyny-PEG-DSPE (1,2-distearoilo-sn-glicero-3-fosfoetanoloamino-N-[biotynylo(glikol polietylenowy)-2000) do szklanej probówki.
   2. Odparować rozpuszczalnik organiczny za pomocą przepływu powietrza, aby utworzyć film lipidowy i umieścić tę próbkę w eksykatorze na 1 godzinę w celu całkowitego odparowania rozpuszczalnika organicznego....

Wyniki

Ryc. 1: System obserwacji hodowli komórek bakteryjnych wewnątrz GV. a) GV są unieruchomione na podpartej membranie poprzez wiązanie biotyny i neutrawidyny na szkle nakrywkowym. GV są inkubowane przez system grzewczy.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Baktotrypton	BD Nauki biologiczne	211705
Chloroform	Wako Pure Chemicals	032-21921
Szkło nakrywkowe (18 × 18 mm)	Matsunami Glass Ind.	C018181	grubość 0,13–0,17 mm
Szkło nakrywkowe (30 × 40 mm)	Matsunami Glass Ind.	na zamówienie	grubość 0,25–0,35 mm
Wirówka stołkowa	Hi-Tech Co.	Zobacz materiał ATT101	Typ wirnika obrotu
Uszczelka dwustronna (10 × 10 × 1 mm)	Nicom	Zobacz materiał T4613 TGL
Glukoza	Wako Pure Chemicals	049-31165
Mikroskop odwrócony	Olympus	IX-73
Metanol	Wako Pure Chemicals	133-16771
Mikroskopijny system stopni grzewczych	TOKAI HIT	TP-110R-100
Olej mineralny	Nacalai Tesque	23334-85
Neutrawidyna	Thermo Fisher Naukowy	31000
Soczewka obiektywu	Olympus	LUCPLFLN 40×/0,6 brak danych
Membrany poliwęglanowe	Lipidy polarne Avanti	610005
Kamera sCMOS	Andor	Żyła 4.2 plus	wielkość porów 100 nm
Chlorek sodu	Wako Pure Chemicals	191-01665
Sacharoza	Wako Pure Chemicals	196-00015
Kąpiel ultradźwiękowa	JAKO JEDNOŚĆ	ASU-3D
Ekstrakt drożdżowy	BD Nauki biologiczne	212750
Plastikowa tubka o pojemności 0,6 ml z pokrywką	Watson	130-806C
Plastikowa tubka o pojemności 1,5 ml z pokrywką	Sumitomo Bakelit Co.	MS4265-M
1-palmitoilo-2-oleoilo-sn-glicero-3-fosfokolina	Lipidy polarne Avanti	850457P
1,2-distearoilo-snglycero-3-fosfoetanoloamina-N-[biotynyl(glikol polietylenowy)-2000]	Lipidy polarne Avanti	880129P	POPC
			Biotyna-PEG-DSPE