Badanie reakcji bakterii na etylen przy użyciu związku uwalniającego etylen

Streszczenie

Źródło: Augimeri, R. V. i wsp., Wykorzystanie związku uwalniającego etylen, kwasu 2-chloroetylofosfonowego, jako narzędzia do badania odpowiedzi etylenu u bakterii. J. Vis. Exp. (2016)

Ten film pokazuje wpływ etylenu wytwarzanego przez kwas 2-chloroetylofosfonowy () na wzrost bakterii i produkcję celulozy. Etylen aktywuje szlaki sygnałowe, które stymulują syntezę celulozy, co skutkuje zwiększonym tworzeniem błonki. Wyniki te podkreślają reakcję bakterii na etylen.

Protokół

1. Testy błonki
   1. Hoduj i oznaczaj ilościowo kultury starterowe Komagataeibacter xylinus w trzech egzemplarzach:
      1. W trzech powtórzeniach zaszczepić pojedynczą kolonię Komagataeibacter xylinus w 5 ml pożywki Schramm and Hestrin (SH) (pH 5) uzupełnionej 0,2% (v/v) celulazy sterylizowanej filtrem. Inkubować kultury w temperaturze 30 °C z mieszaniem przy 150 obr./min, aż do osiągnięcia gęstości optycznej przy 600 nm (OD₆₀₀) wynoszącej 0,3-0,4 (około 72 godzin).
      2. Zebrać kultury starterowe przez odwirowanie (2 000 x g; 4 °C; 10 min). Umyć komórki dwukrotnie 5 ml steryl....

Wyniki

Rysunek 1: Schemat blokowy ilustrujący protokół stosowany do oznaczania i analizy błonki. Podstawowa pożywka o pH 7 SH (60 ml) uzupełniona jest podawana dla trzech oddzielnych inokulacji replik biologicznych i sterylnej kontroli (po 14 ml każda). Kultury te są następnie r.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Celulaza z Trichoderma reesei ATCC 26921	Sigma	Zobacz materiał C2730	Roztwór wodny
Kwas cytrynowy	Sklep BioShop	Numer CIT002.500	Dla podłoża SH
Etefon (≥ 96%; kwas 2-chloroetylofosfonowy)	Sigma	Zobacz materiał C0143	Związek uwalniający etylen
Glukoza	Podstawowy składnik biologiczny	Zobacz materiał GB0219	Dla podłoża SH
Komagataeibacter xylinus ATCC 53582 (Zobacz materiał ATCC)	Kontroler ATCC (Kontroler T	53582	Bakterie wytwarzające celulozę alphaproteobacterium
Sodu fosforan dwuzasadowy siedmiowodny	Sklep BioShop	Czujnik SPD579.500	Sodu fosforan dwuzasadowy siedmiowodny do podłoża SH
Zawartość NaCl	Podstawowy składnik biologiczny	Zobacz materiał SOD001.1	Chlorek sodu do soli fizjologicznej i roztworu kontrolnego
Sodu fosforan jednowodny jednowodny	Sklep BioShop	Zobacz materiał SPM306.500	Sodu fosforan jednozasadowy jednowodny do roztworu kontrolnego
NaOH powiedział:	Sklep BioShop	SHY700.500 powiedział:	Wodorotlenek sodu do regulacji pH
Folia parafinowa	Parafilm	Zobacz materiał PM996	Do uszczelniania płyt i kolb
Pepton (bakteriologiczny)	Sklep BioShop	PEP403.1 powiedział:	Dla podłoża SH
Komora licząca Petroffa-Haussera	Naukowy Hausser	3900	Komora zliczania komórek bakteryjnych
Filtr sterylizacyjny z polieterosulfonu 0,2 μm	Firma VWR	28145-501	Do sterylizacji celulazy
Ekstrakt drożdżowy	Podstawowy składnik biologiczny	G0961 powiedział:	Dla podłoża SH