Ten film przedstawia wysokoprzepustową metodę badań przesiewowych z wykorzystaniem Caenorhabditis elegans do badania knockdownów genów podczas interakcji gospodarz-patogen. Przedstawiono w nim procedurę przygotowania powalanych robaków i przenoszenia ich na płytki testowe w celu oceny skutków zabijania robaków przez patogeny.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Wielodołkowy test na bazie płynu do badań przesiewowych nokautów C. elegans
455 wyświetleń
⸱
26 września 2025
W tym artykule
Streszczenie
Protokół
1. Adaptacja do badań przesiewowych wielu szczepów Caenorhabditis elegans lub knockdownów (konfiguracja przesiewowa interferencji kwasu rybonukleinowego (RNAi))
Nuta: Jest to badanie przesiewowe RNAi opisane dla konfiguracji płytek 24-dołkowych.
- Dodać 1 ml S Basal na dołek 24-dołkowej płytki zawierającej robaki wysiane RNAi. Delikatnie poruszyć robaki, potrząsając płytką, a następnie przenieść robaki do pustej, sterylnej płytki z 24 głębokownikami. Pozwól robakom osiąść grawitacyjnie (~5 minut).
- Odessać supernatant, pozostawiając około 1 ml. Dodaj 7 ml S Basal do każdej studzienki.
- Powtórz kroki 1.1 - 1.2 co najmniej 2 razy więcej. Po końcowym umyciu odessać supernatant, pozostawiając około 400 μL.
- Korzystając z funkcji Resampler sortera robaków, posortuj 22 robaki z 24-dołkowej zawiesiny robaków płytkowych do każdego dołka płytki 384-dołkowej (każda studzienka płytki 24-dołkowej daje 8-12 dołków płytki 384-dołkowej).
- Aby uniknąć głodu, przed sortowaniem należy pipetować bakterie do płytek 384-dołkowych (szczepu, który służy wyłącznie jako pokarm, takiego jak OP50, lub szczepu chorobotwórczego).
- Po posortowaniu robaków na płytkę 384-dołkową, dodaj małe cząsteczki lub inne materiały specyficzne dla eksperymentu.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| COPAS FP BioSorter | Unijna Biometria | Cytometr przepływowy dużych obiektów/sortownik ślimakowy | |
| 24 Blok RB studni głębinowej | Thermo Fisher Naukowy | CS15124 | |
| Płytka 384-dołkowa | Greiner Bio-One | Zobacz materiał MPG-781091 | |
| Pożywki do hodowli nicieni (NGM) | Ilość na litr: 18 gramów agaru, 3 gramy NaCl, 2,5 grama peptonu, 1 ml chlorku wapnia (1 M), 1 ml siarczanu magnezu (1 M), 25 ml buforu fosforanowego i 973 ml wody mili-Q | ||
| S Podstawowy | Ilość na litr: 5,85 grama NaCl, 6 gramów jednozasadowego fosforanu potasu, 1 gram dwuzasadowego fosforanu potasu i 1 litr wody mili-Q | ||
| Agar | USBiologiczne nauki przyrodnicze | Nr kat. A0930 | |
| Zawartość NaCl | USBiologiczne nauki przyrodnicze | Zobacz materiał S5000 | |
| Pepton | USBiologiczne nauki przyrodnicze | Zobacz materiał P3300 | |
| Chlorek wapnia | USBiologiczne nauki przyrodnicze | ||
| Siarczan magnezu | Fisher Naukowy | Zobacz materiał M63-500 | |
| Bufor fosforanowy | Ilość na litr: 132 ml dwuzasadowego fosforanu potasu (1M) i 868 ml jednozasadowego fosforanu potasu (1M) | ||
| Jednozasadowy fosforan potasu | Acros Organics | 7778-77-0 | |
| Dwuzasadowy fosforan potasu | USBiologiczne nauki przyrodnicze | Zobacz materiał P5100 | |
| Szczepy bakteryjne | |||
| P. aeruginosa (PA14) | |||
| Pożywienie E. coli (OP50) | |||
| Bakterie wykazujące ekspresję RNAi E. coli (HT115) | |||
| Szczep robaka | |||
| glp-4(bn2) (Beanan i Strome, 1992, PMID: 1289064) |
