Wizualizacja ruchliwości bakterii za pomocą pożywki półstałej uzupełnionej barwnikiem redoks

Streszczenie

Źródło: Chu, W. i Zhuang, X. Wizualizacja ruchliwości bakterii na podstawie reakcji kolorystycznej. J. Vis. Exp. (2022)

Ten film przedstawia półstały test agarowy na bazie barwnika redoks do oceny ruchliwości bakterii poprzez wizualne rozróżnienie szczepów ruchliwych i nieruchliwych.

Protokół

Szczepy bakteryjne

NUTA: Osiemdziesiąt szczepów wyizolowano ze środowiska wodnego i zidentyfikowano za pomocą automatycznego przyrządu do identyfikacji bakterii (patrz tabela materiałów), w tym Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Vibrio spp., Klebsiella pneumoniae i Aeromonas hydrophila (tabela 1). Staphylococcus aureus (patrz tabela materiałów) zastosowano jako ujemną kontrolę nieruchomą; Jako szczepy kontroli pozytywnej wykorzystano Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa i Salmonella typhimurium (patrz tabela materiałów).

1. Zidentyfikuj testowe szczepy bakterii, które zostaną wykorzystane do analizy ruchliwości.
2. Obejmują ujemne nieruchome kontrole i ruchliwe dodatnie szczepy kontrolne.

Obserwacja ruchliwości bakterii wzmocniona TTC

1. Pobrać pojedyncze kolonie badanych bakterii z płytek agarowych i zaszczepić je w pożywce półstałej za pomocą TTC (chlorek 2,3,5-trifenylotetrazolu), nakłuwając je igłami do zaszczepiania.
2. Hodować probówki w temperaturze 37 °C w inkubatorze przez 24-48 godzin w celu obserwacji wyników.
3. Obserwuj stan wzrostu: scharakteryzuj bakterie jako nieruchome (-), jeśli tylko linia nakłucia jest czerwona. Scharakteryzuj bakterie jako ruchliwe (+), jeśli czerwony kolor rozprzestrzenia się lekko na zewnątrz wzdłuż linii nakłucia.

Tabela 1: Porównanie ruchliwości bakterii.

Naprężać		Pożywka półstała z agarem 0,4%		Pożywka półstała z 0,4% agarem i 0,005% TTC
		24 h	48 h	24 h	48 h
P. aeruginosa (P. aeruginosa) ATCC27853		+	+	+	+
Bakteria E. coli ATCC25922		+	+	+	+
S. typhimurium ATCC14028		+	+	+	+
S. aureus (złocist) ATCC25923		-	-	-	-
E. coli (15)		12	14	13	14
Salmonella spp. (8)		7	8	8	8
A. hydrophila (20)		18	20	20	20
Vibrio spp. (8)		7	8	8	8
P. aeruginosa (24)		18	20	22	23
K. pneumoniae (5)		-5	-5	-5	-5
Liczby wskazują liczbę szczepów dodatnich (+) i ujemnych barwień (-).

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Bacto Agar	Firma Difco
Escherichia coli (Escherichia coli)	Kontroler ATCC (Kontroler T	ATCC25922	Kontrola pozytywna
Pseudomonas aeruginosa	Kontroler ATCC (Kontroler T	ATCC27853	Kontrola pozytywna
Staphylococcus aureus (gronkowiec złocisty)	Kontroler ATCC (Kontroler T	ATCC25923	Ujemna kontrola nieruchoma
Tryptoza	OXOID (OXOID)
TTC (chlorek 2,3,5-trifenylotetrazolu)	Sigma	298-96-4
System automatycznej identyfikacji mikrobiologicznej VITEK 2	Bio Mérieux