Method Article

Wzorce mikroprzepływowe i śledzenie wzrostu bakterii jednokomórkowych na podstawie fluorescencji

October 30th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Pioli, R., et al., Modeling of microorganisms and microparticles through Sequential Capillarity-assisted Assembly. J. Vis. Exp. (2021)

Ten film pokazuje metodę wychwytywania pojedynczych, znakowanych fluorescencyjnie komórek Escherichia coli (E. coli) w pułapkach mikroprzepływowych przy użyciu bezwęglowej zawiesiny i kontrolowanego przepływu, a następnie dodawania składników odżywczych w celu wyzwalania wzrostu i obrazowania fluorescencyjnego mikrokolonii.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Wzorce bakteryjne

  1. Na dzień przed eksperymentem należy wyhodować populację Escherichia coli (szczep MG1655 prpsM-GFP). Zaszczepić kulturę bezpośrednio z zamrożonego bulionu i rosnąć przez noc przez 20 godzin w pożywce bulionu lizogenicznego (LB) w inkubatorze z wytrząsarką w temperaturze 37 °C. Dodać 50 μg/ml kanamycyny, aby komórki zachowały plazmid prpsM-GFP (zielone białko fluorescencyjne).
  2. W dniu doświadczenia należy ustawić inkubator skrzynkowy (rysunek 1A) na 37 °C na kilka godzin przed rozpoczęciem eksperymentu, aby zapewnić jednolitą i stabilną temperaturę. Następnie ustaw pompę strzykawkową i podgrzewaną szklaną płytkę....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
figure-results-1

Rysunek 1: Schemat platformy do sekwencyjnego montażu kapilarnego wspomaganego kapilarnie w kanale mikroprzepływowym. (A) Inkubator pudełkowy. Inkubator skrzynkowy utrzymuje jednolitą i stałą temperaturę (w tym przypadku 30 °C) wewnątrz kana.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Strzykawka BD 10 ml (Luer-Lock)BD300912Służy do wypłukiwania świeżego bulionu lizogennego do kanału mikroprzepływowego
Inkubator skrzynkowyUsługi obrazowania życia Służy do zapewnienia jednolitej i stałej temperatury w kanale
WirówkaEppendorf powiedział:5424RSłuży do zastępowania pożywki nocnej świeżą minimalną ilością pożywki
Fiolka wirówkowaEppendorf powiedział:301200861,5 ml
CETONI Baza 120CETONI GmbH Pompa strzykawkowa
KONTROLER H401-TOkolab Sterownik podgrzewanej płyty szklanej
H601-NIKON-TS2R-SZKŁOOkolab Podgrzewana szklana płyta
Strzykawki insulinowe U 100 z luerCodan Medical ApSCODA621640Strzykawka 1 ml używana do pobierania płynnej zawiesiny podczas procesu modelowania
LB bulion, młynarz (Luria-Bertani)Fisher Naukowy244610Rosół lizogeniczny spłukiwany do kanału mikroprzepływowego
Rurki przesyłowe MasterflexTechnologia MasterflexHV-06419-050,020 '' ID, 0,06'' OD
MOPS (10x)TeknovaZobacz materiał M2101Rozcieńczony dziesięciokrotnie wodą miliQ i stosowany w celu zastąpienia pożywki na noc
Nikon Eclipse Ti2Instrumenty firmy Nikon Mikroskop
Fosforan potasu dwuzasadowySigma AldrichZobacz materiał P3786Dodano do MOPS 1x
Animacja 20Sigma AldrichZobacz materiał P1379 powiedział:Służy do zapewnienia optymalnego kąta zwilżania podczas procesu modelowania

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Microfluidic PatterningBacterial Growth TrackingFluorescence MicroscopyCapillary AssemblySingle Cell AnalysisMicrofluidic TrapsCarbon Free BufferNutrient Induced GrowthTime Lapse ImagingE coli Culture

Related Articles