Badanie Voges-Proskauer do rozróżniania biotypów Vibrio cholerae

Streszczenie

Źródło: Brumfield, K. D. i in., Techniki laboratoryjne stosowane do utrzymania i różnicowania biotypów Vibrio cholerae Clinical and Environmental Isolates. J. Vis. Exp. (2017).

Ten film demonstruje test Voges-Proskauer (VP) mający na celu rozróżnienie trzech biotypów Vibrio cholerae: klasycznego, dzikiego typu El Tor oraz wariantu El Tor. Każda hodowla jest zaszczepiana w podłożu zawierającym glukozę, inkubowana i traktowana α-naftolem i wodorotlenkiem potasu, aby wykryć obecność acetonu. Różowo-czerwony kolor, wskazujący na pozytywną reakcję VP, występuje tylko w dzikim typie biotypowym El Tor, odróżniając go od typów klasycznych i wariantowych.

Protokół

Analiza Voges-Proskauer (VP)

1. Przygotuj nocne hodowle w płynnym bulionie LB.
2. Zaszczepić 4 mL metyloczerwonego Voges-Proskauera, czyli bulionu MR-VP, pipetując 10 μL wcześniej przygotowanej nocnej hodowli do bulionu MR-VP o pojemności 4 mL MR-VP w probówce do sterylnej hodowli i inkubuj z napowietrzaniem w inkubatorze shakerowym przy 225 obr./min przez 12 do 16 godzin w 37 °C.
3. Do 1 mL aliquotów nocnej hodowli MR-VP w probówkach sterylnych należy dodać odpowiednio 150 μL 5% (w/v) α i 50 μL 40% (w/v) KOH.
4. Krótko zawij i pozostawij w temperaturze pokojowej do 4 godzin, aż pojawi się zmiana koloru.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
MR-VP Broth	Difco	216300	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=216300&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3Dmr-vp%2Bmedium%26typeOfSearch%3DproductSearch
KOH	Fisher Scientific	P250-500	https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-hydroxide-pellets-certified-acs-fisher-chemical-5/p250500?searchHijack=true&searchTerm=P250500&searchType=RAPID
α-napthol	MP Biomedicals	204189	http://www.mpbio.com/product.php?pid=05204189