Ocena ruchliwości bakteryjnej za pomocą urządzenia mikrofluidycznego

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Scheidweiler, D. i in. Łączenie urządzeń płynowych z mikroskopią i cytometrią przepływową do badania transportu mikroorganizmów w ośrodkach porowatych na skalach przestrzennych. J. Vis. Exp. (2020).

Ten film demonstruje użycie urządzenia mikrofluidycznego do ilościowego określania ruchliwości bakterii poprzez porowatą matrycę złożoną z losowo ułożonych filarów. Do urządzenia wprowadzane są fluorescencyjnie znakowane bakterie, obrazowane mikroskopią podczas przemieszczania się przez porowatą matrycę do kanału obserwacyjnego i analizowane, aby uzyskać krzywą przełomową (BTC).

Protokół

1. Warunki hodowli bakteryjnej

Pracując pod laminarnym kapturem przepływowym, użyj 100 μL zapasu glicerolowego zielonego białka fluorescencyjnego (GFP) oznaczonego tagiem Pseudomonas putida KT2440 (1 × 10⁷ ^mL-1, przechowywany w temperaturze -80 °C) do inokulacji 5 mL medium Luria-Bertani (LB). Inkubuj w temperaturze 30 °C, potrząsając przy 250 obr./min przez noc.
Następnego dnia ponownie zawiesz 100 μL nocnej hodowli w podłożu LB 5 mL i inkubuj w tych samych warunkach przez 5 godzin (faza wykładnicza). Próbkę 1 mL aliquot należy do probówki 2 mL, pozwól do ostygnięcia do temperatury pokojowej (~15 min) i włóż w wirówkę (2300....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Rysunek 1: Urządzenia fluidiczne do badania transportu mikroorganizmów w ośrodkach porowatych (A) Ilustracja urządzenia płynowego frezowanego z polimetakrylianu metylowego (PMMA). Porowata matryca jest frezowana w warstwie bazowej urządzeni.......