Monitorowanie wzrostu bakterii w różnych formułach ośrodka za pomocą zautomatyzowanego mikrobioreaktora

Streszczenie

Źródło: Hemmerich, J. i in. Protokół optymalizacji heterologicznego wytwarzania białek z wykorzystaniem zautomatyzowanej technologii mikrobioreaktorów. J. Vis. Exp. (2017).

Ten film pokazuje użycie zautomatyzowanego mikrobioreaktora do monitorowania wzrostu bakterii i wydzielania białek fluorescencyjnej w odpowiedzi na różne formuły mediów. Genetycznie zmodyfikowana bakteria ekspresyjna wydzielniowa fluorescencja jest hodowana pod antybiotykowym selekcją i zaszczepiana w dołkach o zróżnicowanych składnikach odżywczych. Optyczne pomiary gęstości komórek i fluorescencji w czasie rzeczywistym umożliwiają porównawczą analizę produkcji białek w różnych warunkach wzrostu.

Protokół

1. Przygotowanie materiałów i procedury definiowania
NUTA: Zaleca się szczegółowe określenie i ustalenie metod eksperymentalnych. Ta standaryzacja zapewnia, że różne wyniki można przewidzieć z wewnętrzną zmiennością biologiczną lub różnym składem ośrodków. ​
NUTA: Usługi dotyczące zasobów medialnych: Przygotuj indywidualne rozwiązania dla wszystkich badanych komponentów mediów. Przygotuj silnie skoncentrowane zapasy, aby umożliwić rozcieńczenie różnych objętości dla wszystkich składników. Oznacza to, że po połączeniu wszystkich roztworów bulwarowych w ich największej objętości zgodnie z planem projektowym, nie m....

Wyniki

Rysunek 1: Zrzut ekranu z listy pipetowania objętościowego do analizy czułości. Wpisy w pierwszej kolumnie przypisują unikalny identyfikator wszystkim woluminom wiersza; ten identyfikator to numer studni MTP docelowej uprawy MTP na tablicy .......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
BioLector	m2p-labs	G-BL-100
Kwiatowa płyta	m2p-labs	MTP-48-BOH	Do uprawy w urządzeniu BioLector
Folia uszczelniająca	m2p-labs	F-GP-10	Sterylne uszczelnienie dla Flowerplate
MATLAB	Mathworks	2016b
KriKit	Forschungszentrum Jülich	N/a	Dostępny za darmo, wymagana instalacja MATLAB-a
Robot pipetujący Janus	Perkin Elmer	N/a	Zawiera instalację oprogramowania "WinPrep"
Mikropłytka głęboka z 12-kolumnową głębokością	E&K Scientific	EK-2034	Pojemnik na roztwory średnie
C. glutamicum pCGPhoDBs-GFP	N/a	N/a	Zawiera plazmid pEKEx2 z fuzją genu GFP i peptydu sygnałowego PhoD z B. subtilis jako wkład ekspresyjny. Plazmid zapewnia oporność na kanamycynę. Opisane i opublikowane przez Meissner i in. Appl Microbiol Biotechnol 76 (3), 633–42 (2007)