Długoterminowa krioprezerwacja szczepów cyjanobakterii z użyciem glicerolu lub dimetylosulfoksydu

Streszczenie

Źródło: Lea-Smith, D. J., i in. Generowanie mutantów oznaczonych i bezznacznikowych u modelowych gatunków cyjanobakterii. J. Vis. Exp. (2016)

Ten film demonstruje krioprezerwację szczepów cyjanobakterii poprzez łączenie skoncentrowanych zawiesin komórkowych z glicerolem lub DMSO i przechowywanie ich w niskich temperaturach, co umożliwia długoterminowe utrzymanie żywotnych hodowli do fotosyntezy i badań genetycznych.

Protokół

1. Przygotowanie mediów kulturowych

1. Przygotuj BG11 medium
   1. Przygotuj roztwory zapasowe 100x BG11, pierwiastki śladowe i bulion żelazny (Tabela 1).
   2. Przygotuj oddzielne roztwory z bulionu fosforanowego, węglanu sodu (Na₂CO₃), bulwaru N-[Tris(hydroksymetylo)metyl] -2-aminoetanolu sulfonowego (TES) buforu oraz wodorowęglanu sodu (NaHCO₃) (Tabela 1).
   3. Autoklaw fosforanów i Na₂CO₃ . Filtr sterylizuje bufor TES oraz NaHCO₃ filtrami 0,2 μm.
   4. Przygotuj BG11, łącząc 976 ml wody, 10 ml 100x BG11, 1 ml pierwiastków śladowych....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
NaNO₃	Sigma	S5506
MgSO₄·7H₂O	Sigma	230391
CaCl₂	Sigma	C1016
Kwas cytrynowy	Sigma	C0759
Na₂EDTA	Rybak	EDT002
H₃BO₃	Sigma	339067
MnCl₂·4H₂O	Sigma	M3634
ZnSO₄·7H₂O	Sigma	Z4750
Na₂MoO₄·2H₂O	Sigma	331058
CuSO₄·5H₂O	Sigma	209198
Co(NO₃)₂·6H₂O	Sigma	239267
Cytrynian amonu żelaza	Sigma	F5879
K₂HPO	Sigma	P3786
Na₂CO₃	Rybak	SODC001
TES	Sigma	T1375
NaHCO₃	Rybak	SODH001
HEPES	Sigma	H3375
Cyjanokobalamina	Sigma	47869
Na₂S₂O₃	Sigma	72049
Bacto agar	BD	214010
Sacharoza	Rybak	SUC001
Miska Petriego 90 mm z potrójnym wywiechem	Greiner	633185
Filtry 0,2 μm	Sartorius	16534
100 ml stożkowe kolby	Pyrex	CON004
Parafilm M 100 mm x 38 m	Bemis	FIL003
Phusion polimeraza DNA o wysokiej wierności	Phusion	F-530
Agarozy	Melford	MB1200
Zestaw do oczyszczania DNA	MoBio	12100-300
Endonukleazy restrykcyjne	NEB
Ligaza T4	Thermo Scientific	EL0011
Bulion Luria Bertani	Invitrogen	12795-027
MES	Sigma	M8250
Siarczan kanamicyny	Sigma	60615
Ampicyliny	Sigma	A9518
Miniprep GeneJET do miniprepów plazmidów	Thermo Scientific	K0503
14 ml rurka z okrągłym dnem	BD Falcon	352059
Polimeraza DNA GoTaq G2 Flexi	Promega	M7805
Koraliki szklane o średnicy 425-600 μm	Sigma	G8772
Glicerol	Sigma	G5516
DMSO	Sigma	D8418
Żarówki świetlówkowe	Gro-Lux	69
Fotobioreaktor HT multitron	Infors