Przygotowanie tkanek pęcherza myszy do wizualizacji infekcji bakteryjnej

Streszczenie

Źródło: O'Brien, V. P., i in., Nawracająca infekcja dróg moczowych Escherichia coli wywołana ekspozycją pęcherza pochwowego Gardnerella u myszy. J. Vis. Exp. (2020)

Ten film demonstruje wykorzystanie skaningowej mikroskopii elektronowej do wizualizacji kolonizacji bakterii oraz interakcji gospodarz–patogen w nabłonku pęcherza moczowego modelu myszy przed zakażeniem.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały przeanalizowane przez lokalny instytucjonalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Obrazowanie pęcherzy za pomocą skaningowej mikroskopii elektronowej

   UWAGA: Procedurę tę można wykonać w dowolnym momencie, gdy pożądana jest wizualizacja urotelu. Jak pokazano na Rysunku 1 (fioletowe ramki), uropatogeniczne interakcje E. coli (UPEC) z urotelem najlepiej wizualizować między 6 a 24 godzinami po szczepieniu UPEC podczas fazy tworzenia rezerwuaru, a złuszczanie urotelialne wywołane przez Gardnerella wagalis najlepiej zobrazo....

Wyniki

Rysunek 1. Schemat modelu myszy. Harmonogram jest podkreślony, aby odzwierciedlać fazy lub procedury modelu opisane w protokole. Faza 1 (pomarańczowa): Tworzenie wewnątrzkomórkowych uropatogennych rezerwuarów E. coli (UPEC). Myszy są.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
30G x 1/2 igły	BD	305106	Dla cewników
5 1/2" prosty hemostat z kleszczem	McKesson	487377	Utrwalanie pęcherza in situ
ACE 600 Powlak Rozterkujący	Leica		Przetwarzanie próbek SEM
Aluminiowy SEM stub	Ted Pella	16111	Przetwarzanie próbek SEM
Chlorek wapnia	EMS	12340	Utrwalanie pęcherza in situ
Przewodząca taśma z klejem węglowym	Ted Pella	16084-1	Przetwarzanie próbek SEM
Przewodząca srebrna farba	Ted Pella	16034	Przetwarzanie próbek SEM
CPD 300 Krytyczny Punkt Suszarka	Leica		Przetwarzanie próbek SEM
Metalowy klips cytolejka	Simport	M964B	Cytospinowa analiza moczu
Etanol	EMS	15050	Przetwarzanie próbek SEM
Glukoza	Sigma	G7528	Dla NYCIII G. vaginalis media wzrostu
Glutaraldehyd	EMS	16320	Utrwalanie pęcherza in situ
Zestaw do bejcowania Hema 3	Fisher	23123869	Cytospinowa analiza moczu
HEPES	Cellgro	25-060-Cl	Dla NYCIII G. vaginalis media wzrostu
Iridium	Ted Pella	91120	Przetwarzanie próbek SEM
Merlin FE-SEM	Zeiss		Skaningowy mikroskop elektronowy
Oczyszczacz wody Milli-Q	Millipore	IQ-7000	Przetwarzanie próbek SEM
Czterotlenek osmu	EMS	19170	Przetwarzanie próbek SEM
Paraformaldehyd	EMS	15710	Utrwalanie pęcherza in situ
Rury polietylenowe	Intramedyk	427401	dla cewników
Proteose Peptone #3	Fisher	DF-122-17-4	Dla NYCIII G. vaginalis media wzrostu
Ostrze do brzytwy pokryte podwójną krawędzią PTFE	EMS	72000	Cięcie pęcherzy dla SEM