Obrazowanie na żywo interakcji żywiciel-patogen w zarodkach danio dano zakażonych Mycobacterium abscessus

W tym artykule

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Bernut, A. i inni. Rozszyfrowanie i obrazowanie patogenezy oraz układania rdzenia ropnia Mycobacterium absceptus w zarodkach danio dano dano. J. Vis. Exp. (2015)

Ten film demonstruje protokół wykorzystujący transgeniczne zarodki danio danio ekspresyjne ekspresujące makrofagi fluorescencyjne i zakażone fluorescencyjnym szczepem Mycobacterium abscessus rough do wizualizacji interakcji żywiciel-patogen. Pokazuje, jak pozakomórkowe przewody umożliwiają unikanie odporności, wspierając przeżycie bakterii i uszkodzenia komórek gospodarza.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Obrazowanie na żywo zakażenia ropniem M.

Zamontuj zarodki znieczulone tricainą w agarozze o niskiej temperaturze topnienia o 1% w szalce Petriego o średnicy 35 mm przed obserwacjami mikroskopowymi epifluorescencji. Do mikroskopii konfokalnej z odwróconą jamą używaj szklanej dolnej misy lub do mikroskopii konfokalnej w pionie szkiełka z pojedynczą jamą. Ukierunkuj zarodek w pożądanej pozycji i pokryj stwardniałą agarozę wodą rybą zawierającą tricainę.
Używaj mikroskopu epifluorescencyjnego z obiektywem 10X do sekwencyjnego pozyskiwania i transmisji obrazów fluorescencyjnych całego zarodka. Alternatywnie, użyj mikroskopu konfokalnego z obiektywami 40X lub 63X, aby zobaczyć aktywność komórek odpornościowych po infekcji.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa

Firma

Numer katalogowy

Komentarze

Agaroza niskotopniejąca

Sigma-Aldrich

Sól metanonsulfonianowa etylo3-aminobenzoanu (tricaina)

Sigma-Aldrich

A5040

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Powiązane artykuły