Ilościowa ilościowa ilość obciążenia bakteryjnego tkanki w modelu myszy przewlekłej infekcji jelit

Abstract

Źródło: Lo, B. C. i in. Przewlekła infekcja salmonellą wywołana włóknieniem jelit. J. Vis. Exp. (2019)

Film demonstruje ilościowe określenie obciążenia bakteryjnego w mysiim modelu przewlekłej infekcji streptomycynowooporną Salmonella typhimurium. Po eutanazji i sterylnej sekcji pobierane są tkanki cekalne i śledzionowe, ujednolicane stalowymi kulkami w celu uwalniania bakterii i seryjne rozcieńczane. Rozcieńczenia nakładane są na selektywnym agarze, a widoczne kolonie są liczone w celu oszacowania obciążenia bakterii na gram tkanki w miejscach jelitowych i układowych.

Protocol

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały przeanalizowane przez lokalny instytucjonalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Przygotowanie kultur Salmonella Typhimurium ΔAroA do doustnej dawki myszy

1. Z zamrożonego zapasu glicerolu S. Typhimurium ΔAroA przygotuj płytkę smugową z agarem Luria-Bertani (agar LB) zawierającą 100 μg/mL streptomycyny z sterylną pętlą inokulacyjną. Inkubuj przez noc w temperaturze 37 °C. Płyty smug można przechowywać do tygodnia w temperaturze 4 °C.
2. Dzień przed zakażeniem przygotuj antybiotyk, rozpuszczając 0,5 g streptomycyny....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
2 ml rury zamkowe z okrągłym dnem	Eppendorf	22363344
Koraliki ze stali nierdzewnej	Qiagen	69989
PBS	Gibco	10010031
Końcówki pipetyczne z dużym otworem	Fisher	2707134
Płyty megablokowe 2 mL	Sarstedt	82.1972.002
Igły do gavage	FST	18061-22
Siarczan streptomycyny	Sigma	S9137
Młyn mieszający	Retsch	MM