Terapia światłem niebieskim w leczeniu lekoopornych infekcji bakteryjnych w ranach oparzonych w modelu myszy

Streszczenie

Źródło: Wang, Y. i in. Badanie in vivo nad terapią przeciwdrobnoustrojowym niebieskim światłem w leczeniu wieloopornych infekcji oparzeń Acinetobacter baumannii z wykorzystaniem obrazowania bioluminescencji. J. Vis. Exp. (2017)

Ten film pokazuje procedurę leczenia zakażeń oparzeń spowodowanych bioluminescencyjnymi, opornymi na leki bakteriami u myszy za pomocą terapii światłem niebieskim, a następnie wykonano obrazowanie bioluminescencyjne w celu monitorowania skuteczności leczenia.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały przeanalizowane przez lokalny instytucjonalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Przeciwdrobnoustrojowa terapia niebieskim światłem w leczeniu infekcji A. baumannii u myszy

1. Znieczulaj myszy za pomocą intraotrzewnowego zastrzyku koktajlu ketaminy i ksylazyny (100 mg/kg - 20 mg/kg). Brak odruchu palpebralnego sugeruje odpowiednią głębokość znieczulenia.
2. Losowo podziel myszy na grupę poddaną aBL (n = 10) oraz grupę kontrolną nieleczoną (n = 10).
3. W grupie z antybakteryjnym niebieskim światłem (aBL) należy przykryć oczy myszy folią aluminiową, aby uniknąć nadmiernej ekspozycji na światło. Umieść myszy wypalniki bezpośrednio pod diodą LED (LED), z pokrywką 35-milimetrowej szalki Petriego pod brzuchem myszy, aby utrzymać ich plecy poziome.
4. Wymień miernik energii/energii wspomniany w kroku 3.5 myszką na kwadratowej szalce Petriego. Sstosuj wysokość myszy do pozycji, w której odległość między aperturą LED a powierzchnią przepalenia myszy jest równa odległości między aperturą LED a poziomem czujnika światła w mierniku energii/energii.
5. Napromieniuj zainfekowane oparzenia z napromieniowaniem 100 mW/^cm2. Podawaj aBL w dawkach 72 J/^cm2 , aż osiągniesz łączną dawkę 360 J/^cm2 (np. 0, 72, 144, 216, 288 i 360 J/^cm2). Po każdej lekkiej dawce wykonaj bioluminescencyjne obrazowanie myszy.
6. W grupie kontrolnej bez leczenia wykonaj obrazowanie bioluminescencji oparzeń myszy, stosując te same interwały czasowe co w grupie leczonej aBL.
7. Przed odzyskaniem myszy należy położyć je na podgrzewanym wodą łóżku chirurgicznym, aby zapobiec utracie ciepła i hipotermii. Obserwuj aktywność i odruch palpebralny myszy aż do rekonwalescencji. Po odzyskaniu myszy należy je trzymać 2-3 w klatce.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
IVIS	PerkinElmer Inc, Waltham, MA	IVIS Lumina Seria III	Przedkliniczne obrazowanie in vivo
Dioda LED dioda LED z diodą ludolującą	VieLight Inc, Toronto, Kanada	415 nm	Źródło światła do oświetlenia
Miernik energii/mocy	Thorlabs, Inc., Newton, NJ	PM100D	Detektor naświetlenia światła
Mysz	Charles River Laboratories, Wilmington, MA	BALB/c	7-8 tygodni wieku, 17-19 g wagi
Acinetobacter baumannii	Brooke Army Medical Center, Fort Sam Houston, TX	Izolat kliniczny	Inżynieryjne odkształcenie luminescencyjne
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami, 1x roztwór	Fisher Scientific	BP24384	Standardowy bufor fosforanowy stosowany w wielu procedurach biomolekularnych
Końcówki Fisher Scientific Redi-Tip Pipet, 1-200 μL	Fisher Scientific	02-707-502	Pipet Tips
Blok mosiężny	Small Parts, Inc., Miami, FL	10 mm na 10 mm	Za tworzenie oparzeń u myszy
Extreme Dragon PBI/Kevlar High-Heat Gloves	Superior Glove Works Ltd, Cheektowaga, NY	PBI83514	Rękawice odporne na wysoką temperaturę
Potrawy Greinera	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 mm ×10 mm
Cyfrowa płyta grzewcza Corning	Cole-Parmer Instrument Company, LLC	UX-84301-65	10" x 10", 220 VAC, do wrzenia wody
Myszka/szczur – cienkie linie, podgrzewane wodą łóżko chirurgiczne	Systemy E-Z	EZ-211	Zapobiega utracie ciepła i hipotermii podczas operacji
Maść weterynarza	S&K Pharma, GmbH	Kerato Biciron 5%, Augensalbe	Maść okulistyczna zapobiegająca suchości oczu