Obrazowanie zmian morfologicznych u bakterii za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej żywych komórek

Abstract

Źródło: Brzozowski, R. S. i in. Mikroskopia fluorescencyjna żywych komórek w celu badania lokalizacji białek podkomórkowych oraz zmian morfologii komórek u bakterii. J. Vis. Exp. (2019)

Ten film demonstruje mikroskopię fluorescencyjną żywych komórek, aby wizualizować zmiany morfologiczne bakterii w czasie rzeczywistym. Opisuje etapy związane z obrazowaniem, akwizycją poklatkową oraz dekonwolucją w celu uzyskania obrazów o wysokiej rozdzielczości w czasie rzeczywistym.

Protocol

1. Obrazowanie

1. W dniu eksperymentu włącz system mikroskopu. Uruchom oprogramowanie do obrazowania (patrz Tabela materiałów), klikając odpowiednią ikonę na pulpicie. Zainicjalizuj mikroskop, klikając opcję Inicjalizuj mikroskop (przycisk oznaczony mikroskopem) w oknie dialogowym uruchamiającym oprogramowanie. Upewnij się, że obiektyw jest całkowicie opuszczony za pomocą grubej korekty mikroskopu przed inicjalizacją.
   UWAGA: Po inicjalizacji powinny pojawić się trzy dodatkowe okna dialogowe oprócz menu start: resolve3D, zbieranie danych oraz monitor filtrów.
2. Na obiektyw immersyjny 100x dostarczany prz....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Agarose	BioReagenty Fishera	BP160-100	Stopień z biologii molekularnej – Niski EEO
FM4-64	Invitrogen	T3166	Mikroskopia
Szklana miska na dnie	MatTek	P35G-1.5-14-C	Mikroskopia
Mikroskop	GE	DeltaVision Elite	Spersonalizowany stojak mikroskopu Olympus IX-71; Niestandardowa wieża oświetleniowa oraz moduł oświetlenia transmisyjnego. Cele: PLAPON 60X (N.A. 1.42, WD 0.15 mm); OLEJ OLY 100X (N.A. 1,4, WD 0,12 mm); DIC Prism Nomarski do 100x celu; aparat CoolSnap HQ2; SSI Assembly 7-kolorowy; Komora kontroli środowiska – nieprzezroczysta.
PC190723	MilliporeSigma	3445805MG	Inhibitor FtsZ
SoftWorx	GE		Oprogramowanie obrazujące dostarczone przez producenta