Ocena wpływu inhibitorów na tworzenie pelikuli u Bacillus subtilis

Streszczenie

Źródło: Bucher, T. i in. Metodologie badania biofilmów B. subtilis jako modelu charakteryzowania inhibitorów biofilmu małocząsteczkowego. J. Vis. Exp. (2016)

Ten film demonstruje test tworzenia pelikuli z użyciem Bacillus subtilis do oceny inhibitorów małych cząsteczek zakłócających syntezę matrycy i rozwój biofilmu, dostarczając modelu do przesiewania związków selektywnie hamujących wzrost związany z powierzchnią, nie wpływając na swobodnie unoszące się komórki.

Protokół

1. Ocena wpływu inhibitorów małych cząsteczek na tworzenie kolonii pellicle i biofilmu

1. Przygotuj 2x roztwór zdefiniowanego biofilmu indukującego MSgg (monosodowy glutaminian-glicerol) bez chlorku wapnia i heksahydratu żelaza(III). Po sterylizacji filtrem dodaj chlorek wapnia. Medium jest gotowe do bezpośredniego użycia lub może być przechowywane w temperaturze 4 °C w ciemności.
2. Przygotuj rozcieńczenie 1x MSgg w dniu eksperymentu.
   1. Rozcieńcz 2x medium MSgg do 1x za pomocą sterylnej wody destylowanej (pellicles) lub sterylnego 3% gorącego (80 °C) agaru (biofilmy) i dodaj chlorek żelaza(III) do końcowego stężenia 50 μM (pellicles) lub....

Wyniki

Rysunek 1. Przegląd koncepcyjny dla identyfikacji solidnego wyposażenia eksperymentalnego do oceny specyficznego hamowania powstawania biofilmu. Kryteria selekcji dla inhibitorów małych cząsteczek, które wskazują na specyficzne zakłócenia w .......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Bulion Luria, Lennox	Difco	240230
Fosforan potasu monozasadowy	Sigma, 136,09 g/mol	P0662-500G
Dwubaziz fosforanu potasu	Fisher Scientific, 174,18 g/mol	BP363-1
3-(N-morfolino)propanosulfonowy kwas	Fisher Scientific, 209,27 g/mol	BP308-500
Heksahydrat chlorku magnezu	Merck, 203,30 g/mol	1.05833.0250
Chlorek wapnia bezwodny	J.T. Baker, 110,98 g/mol	1311-01
Chlorek manganu(II) tetrahydrat	Sigma, 197,91 g/mol	31422-250G-R
Chlorek żelaza(III) heksahydrat	Sigma, 270,30 g/miesiąc)	F2877-500G
Chlorek cynku bezwodny	Acros Organics, 136,29 g/mol	424592500
Chlorek tiaminy	Sigma, 337,27 g/mol	T1270-100G
L-tryptofan	Fisher Scientific, 204,1 g/mol	BP395-100
L-fenyloalanina	Sigma, 165,19 g/mol	P5482-100G
L-treonina	Sigma, 119,12 g/mol	T8625-100G
Glicerol bezwodny	Bio-Lab Itp	712022300
Sole sodowe kwasu L-glutaminowego nawadniają	Sigma, 169,11 g/mol	G1626-1KG
D-leucyna	Sigma, 169,11 g/mol	855448-10G
Bezwodny etanol	Gadot	830000054
Wstrząs 37 °C	New Brunswick Scientific Innowa42	NA
Wirówka	Wirówka stołowa Eppendorf 5424	NA
Inkubator 30 °C	Segregator	NA
Inkubator 23 °C	Segregator	NA