Przygotowanie modelu aspiracji orofarygealnej u myszy w celu wykrycia bakteryjnych infekcji płuc

Streszczenie

Źródło: Nielsen, T. B. i in., Model aspiracji orofaryngealnej myszy bakteryjnego zapalenia płuc związanego z respiratorem i nabytego w szpitalu. J. Vis. Exp. (2018)

Ten film pokazuje procedurę dostarczania bakterii przez gardło do płuc znieczulonej myszy, aby wywołać infekcję płuc i wywołać odpowiedź immunologiczną.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały przeanalizowane przez lokalny instytucjonalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Szczepienie/zakażanie myszy

1. Zawiesz znieczuloną mysz, zawieszając ją na górnych siekaczach na mocnym, cienkim sznurku (np. nici dentystycznej) przymocowanym do stałego przedmiotu na wysokości około dwukrotności długości ciała myszy (np. 20 cm) nad powierzchnią operacyjną (np. stoł laboratoryjny).
2. Delikatnie wyciągnij język myszy z ust, używając sterylnych, tępych kleszczy. Przenieś język na sterylny, rękawiczkowany palec, aby zapobiec przypadkowemu zmiażdż....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Komora do znieczulenia	Kent Scientific Corporation	VetFlo-0720	Mieszczą do 5 myszy
Kriomold, rozmiar średni	Sakura Tissue-Tek	4566	Jednorazowe formy do próbek winylowych, 15×15×5 mm
Nić dentystyczna	Oral-B	37000469537	Przywiązuj do słupka stajni, około 6" powyżej stołu
Kleszcze	VWR	82027-440	Używa się do delikatnego wyciągania języka z pyska myszy
Izofluran do znieczulenia	Abbott	10015516	Można stosować leki alternatywne; odpowiednio zmodyfikuj procedurę
Wkład iSTAT	Abbott	03P79-25	Dostępne są różne wkłady dostosowane do Twoich potrzeb
Ketamina, 100 mg/mL	Zaopatrzenie Medyczne Zachodnie	4165	Rozcieńcz 1:10 w PBS do 1 mg/mL i połącz z ksylazyną w dawce 1 mg/mL
Maść na oczy	Akorn	Łzy odnowione	Unikaj dotykania oka końcówką dozownika
Sól fizjologiczna z buforem fosforanowym (PBS)	Corning	21-031-CM	PBS Dulbecco bez wapnia i magnezu
Końcówki pipety, 200-μL	VWR	10017-044	Autoklawuj przed użyciem
Pifleter, 200-μL	Gilson	Pipetman P200	Autoklawuj i kalibruj przed użyciem
Rozpylacz i komórka bakteryjna	Bel-Art	F377360006	Sterylizuj przez pieczenie lub autoclaw przed każdym użyciem
Fiolka, kriogeniczna, 2,0 mL	Corning	430659	Wykorzystywane do kriogenicznego magazynowania skoncentrowanych bakteryjnych inokuli