Fotobielenie pigmentów cyjanobakterii do obrazowania białek regulujących wzrost

Streszczenie

Źródło: Zhan, Y. i inni. Fotobielenie umożliwia obrazowanie pierścienia FtsZ w Cyanobacterium Prochlorococcus w superrozdzielczości. J. Vis. Exp. (2018).

Ten film pokazuje procedurę fotobielenia pigmentów w komórkach cyjanobakterii przy użyciu światła ksenonowego w warunkach zimnych, aby poprawić obrazowanie fluorescencji białek regulujących wzrost.

Protokół

1. Fotobielenie pigmentów chlorofilowych w etapie blokującym

1. Przenieś pokrywkę do miski do bejcowania. Na pokrywkę dodaj 50 μL buforu blokującego, który zawiera 0,2% (v/v) niejonowego detergentu-100 oraz 3% (v/v) koziego serum.
2. Umieść całą płytkę barwiącą na lodzie i przesuń ją pod źródło światła ksenonowego w celu fotobielenia na co najmniej 60 minut, z intensywnością światła 1 800 μmol fotonów/m²·s.
3. Po fotobieleniu i blokowaniu ostrożnie usuń bufor blokujący, wchłaniając go krawędzią ręcznika papierowego.
   UWAGA: Intensywność światła ksenonowego jest tak wysoka, że potrzebne są odpowiednie okulary przeciwsłoneczne do ochrony oczu. Jednocześnie owiń źródło światła i płytę folią aluminiową, aby zapobiec przeciekowi światła, które może spowodować uszkodzenie oczu. Sprawdzaj pokrywkę co 15 minut, aby upewnić się, że pozostaje wilgotna. Jeśli jest suchy, dodaj 50 μL bufora blokującego.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Cząstki polistyrenu	Sferotechnika	PP-20-10	2,0-2,4 μm
Slip pokrywkowy	Marienfeld	111580	18 mm ∅, grubość nr 1
Etanol	Scharlau	ET00021000
Poli-L-lizynowy bromigłowiec	Sigma-Aldrich	P9155	mol wt 70 000-150 000
Paraformaldehyd	Sigma-Aldrich	158127
Roztwór glutaraldehydu, 50%	Sigma-Aldrich	340855
PBS	Sigma	P3813
Triton X-100	Sigma	T8787
Sól sodowa EDTA, 2-hydratowa	Biotechnologia złota	E-210-500
Baza Trizma	Sigma	T1503
Lizozym	Sigma	L6876
Serum koziego	Sigma	G9023
Źródło światła XD-300 Xenon			250 W