Ustanowienie infekcji bakteryjnej u larw Drosophila

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Hiroyasu, A., D i in., Ekstrakcja hemocytów z larw Drosophila melanogaster do zakażeń drobnoustrojowych i analiza. J. Vis. Exp. (2018)

Ten film pokazuje procedurę wywoływania infekcji bakteryjnej u larw Drosophila poprzez umieszczenie ich w kropli bakteryjnej i nakłucie igłą wolframową. Larwy są następnie wysiadane na rowkowatej, bogatej w składniki odżywcze płytce agarowej w celu badania interakcji żywiciel-patogen.

Protokół

1. Zakażenie in vivo

Podgrzej talerz z sokiem owocowym Drosophila w temperaturze pokojowej przez 15 minut.
1. Dodaj 30 g agaru do 700 ml wody i poddaj go w autoklawie przez 40 minut.
2. Rozpuścić 0,5 g metylparabenu w 10 mL etanolu absolutnego.
3. Dodaj roztwór metylparabenów do 300 ml koncentratu soku owocowego.
4. Szybko wymieszaj koncentrat soku z roztworem agaru w autoklawie i podawaj 5 ml do 10 × szalek Petriego o średnicy 35 mm.
5. Po 15 minutach ostygnięcia talerzy przechowuj je w temperaturze 4 °C.
Przygotuj larwy trzeciego stadium.
Umieść pastę drożdżową na talerzu agarowym. Wykonaj drobne cięcie na talerzu agarowym, gdzie larwy mogą migrować, aby uniknąć wysuszenia (Rysunek 1A). Złóż igłę z wolframu o średnicy 0,001 mm z kleszczami trzymającymi za pomocą folii parafinowej (rysunek 1B, C).
Pipeta 50 μL wysokomianowodającej mCherry ekspresyjnie Coxiella burnetii (5,95×10⁹ GE/mL) na folię parafinową pod mikroskopem stereomikroskopowym i umieść larwy w basenie bakterii.
Umieść larwy w kałuży z bakteriami, nakłuj je igłą wolframu (rysunek 3D) i przenieś na płytkę agarową (rysunek 1E).
Przelej pozostałe medium patogenowe na płytkę agarową i uszczelnij ją folią parafinową.
Larwy trzymaj na płytkach w wilgotnym powietrzu aż do pożądanego czasu po zakażeniu (rysunek 1F). W tym eksperymencie larwy zakażone C. burnetii pozostają na płycie przez 24 godziny.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Rysunek 1: Zakażenie in vivo. A) Do inkubacji larw zakażonych in vivo stosuje się płyty agarowe soku Drosophila oraz pastę drożdżową. Na płytce agarowej wykonuje się cięcia, aby ułatwić larwalne przedłużenie życ...