Wyciszanie mikroRNA w roślinach ziemniaka z wykorzystaniem wirusa Potato Virus X

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Zhao, J., et al. Potato Virus X-Based microRNA Silencing (VbMS) In Potato. J. Vis. Exp. (2020).

W tym filmie zaprezentowano wykorzystanie Agrobacterium tumefaciens do wprowadzenia konstruktu opartego na wirusie X ziemniaka (PVX) do roślin ziemniaka hodowanych in vitro w celu wywołania wirusowego wyciszania mikroRNA (VbMS). Metoda ta umożliwia systemowe tłumienie docelowego mikroRNA, co pozwala badaczom na analizę jego roli w rozwoju roślin poprzez obserwację zmian fenotypowych.

Protokół

1. Wykonaj test VbMS oparty na PVX u roślin ziemniaka.

Przesadź 4-tygodniowe rośliny ziemniaka hodowane in vitro do gleby. Przesadzone rośliny zostaną poddane analizie VbMS 3–4 dni później.
Zaszczep rośliny ziemniaka Agrobacterium zawierającym plazmidy PVX-STTM (Short Tandem Target Mimic).
UWAGA: W przypadku analizy VbMS u ziemniaka infiltrację za pośrednictwem Agrobacterium oraz szczepienie metodą zarysowania wykałaczką wykonuje się jednocześnie.
1. Wybierz i zaszczep pozytywne transformanty zawierające wektory PVX-STTM do 50 mL płynnej pożywki LB zawierającej 50 μg/mL kanamycyny ....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Rycina 1: VbMS miR165/16 w tetraploidalnej odmianie ziemniaka Katahdin. Fenotypy roślin ziemniaka (Katahdin) wykazujących ekspresję kontrolnego wektora PVX lub PVX-STTM165/16. Purpurowe strzałki wskazują ektopicznie powstałe struktury liści.......