Transdukcja modelu wątroby Dostosuj roztwór wektora wirusa towarzyszącego adenowirusom (AAV) do stężenia końcowego 2,7 x 10¹³ genomów wektora w 5 ml, dodając odpowiednią objętość soli fizjologicznej w buforze fosforanowym (PBS). Odłącz wątrobę od obiegu pożywki, usuwając cewnik z drenu. Podłącz strzykawkę o pojemności 5 ml do kaniuli żyły wrotnej i wstrzyknij cały roztwór wektora AAV (5 ml). UWAGA: Opcjonalnie można dodać czerwień fenolową (5 µg/ml), aby śledzić dystrybucję roztworu wektora AAV w całej wątrobie. Inkubuj przez 1 h bez pompowania. Stopniowo zwiększaj prędkość przepływu, zaczynając od 1,25 ml/min przez 10 min, następnie 2,5 ml/min przez 20 min i 3,75 ml/min przez 30 min. Hoduj recelularyzowaną wątrobę szczura przez 6 dni. UWAGA: Co drugi dzień wymieniaj jedną trzecią pożywki na świeżą pożywkę (50 ml). Pobieraj próbki pożywki hodowlanej w celu pomiaru parametrów fizjologicznych, takich jak aktywność dehydrogenazy mleczanowej, pH próbek pożywki oraz stężenie glukozy i mleczanu. Hiller, T., i wsp.Badanie wektorów wirusowych w trójwymiarowym modelu wątroby zasiedlonej linią komórkową raka hepatokomórkowego człowieka HepG2. J. Vis. Exp., (2016)
W tym filmie zaprezentowano dostarczanie genów za pomocą wirusa towarzyszącego adenowirusom w zhumanizowanym rusztowaniu wątroby szczura. Wektor dostarcza transgen kodujący fluorescencyjny reporter oraz RNA wyciszające geny do komórek wątroby poprzez endocytozę zależną od receptorów. Model ten umożliwia efektywną transdukcję w perfuzyjnym systemie trójwymiarowej tkanki wątroby.
