Method Article

Zastosowanie reaktorów z przepływem kroplowym i obrotowym dyskiem do analizy biofilmu Staphylococcus aureus

DOI:

10.3791/2470

December 27th, 2010

In This Article

Erratum Notice

Important: There has been an erratum issued for this article. Read More ...

Erratum

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Formal Correction: Erratum: The Use of Drip Flow and Rotating Disk Reactors for Staphylococcus aureus Biofilm Analysis
Posted by JoVE Editors on 3/14/2011. Citeable Link.

null

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Szczegółowo przedstawiono protokoły wykorzystania biofilmów przepływowych w systemie otwartym z reaktorami przepływowymi i reaktorami z obrotowym dyskiem.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Uważa się, że większość mikrobów w naturze istnieje jako społeczności związane z powierzchnią w biofilmach. 1 Biofilmy bakteryjne są zamknięte w matrycy i przyczepione do powierzchni. 2 Tworzenie i rozwój biofilmu są powszechnie badane w laboratorium przy użyciu systemów wsadowych, takich jak płytki do mikromiareczkowania, lub systemów przepływowych, takich jak komory przepływowe. Metodologie te są przydatne do badań przesiewowych zmutowanych i bibliotek chemicznych (płytki do mikromiareczkowania)3 lub do hodowli biofilmów w celu wizualizacji (komórki przepływowe)4. W tym miejscu przedstawiamy szczegółowe protokoły hodowli Staphylococcus aureus w dwóch dodatkowych typach biofilmów systemu przepływowego: reaktorze biofilmu z przepływem kroplowym i reaktorze biofilmu z obrotowym dyskiem.

Reaktory biofilmu z przepływem kroplowym są przeznaczone do badania biofilmów hodowanych w warunkach niskiego ścinania. 5 Reaktor przepływowy kroplowy składa się z czterech równoległych kanałów testowych, z których każdy może pomieścić jeden standardowy szklany mikroskop wielkości szkiełka mikroskopowego lub odcinek cewnika lub wsuwki. Reaktor z przepływem kroplowym jest idealny do monitorowania mikroczujników, ogólnych badań biofilmu, próbek kriosekcji biofilmu, produkcji wysokiej biomasy, oceny materiałów medycznych i testowania urządzeń medycznych na miejscu. 6,7,8,9

Obrotowy reaktor dyskowy składa się z teflonowego dysku zawierającego wgłębienia na wymienne kupony. 10 Wymienne kupony mogą być wykonane z dowolnego materiału nadającego się do obróbki. Dno obracającego się dysku zawiera magnes sztabkowy, który umożliwia obrót dysku w celu wytworzenia ścinania powierzchni cieczy na kuponach spłukiwanych powierzchniowo. Cały dysk zawierający 18 kuponów umieszczony jest w szklanym zbiorniku reaktora z bocznym ramieniem o pojemności 1000 ml. Płynna pożywka wzrostowa krąży w naczyniu, podczas gdy dysk jest obracany przez mieszadło magnetyczne. Kupony są wyjmowane ze zbiornika reaktora, a następnie zeskrobywane w celu pobrania próbki biofilmu do dalszych badań lub obrazowania mikroskopowego. Reaktory z obrotowym dyskiem są przeznaczone do laboratoryjnych ocen skuteczności biocydów, usuwania biofilmu i wydajności materiałów przeciwporostowych. 9,11,12,13

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Reaktor biofilmu z przepływem kroplowym

  1. Reaktor biofilmu z przepływem kroplowym (dostępny w firmie Biosurface Technologies lub wersje zaprojektowane na zamówienie mogą być zwykle wykonane przez uniwersyteckie warsztaty mechaniczne, patrz rysunek 1) jest montowany i sterylizowany w autoklawie. Montaż polega na umieszczeniu kuponów w komorach oraz zabezpieczeniu pokryw komór. Komora wraz z podłożem biofilmowym (bulion sojowy tryptyczny 2 gramy/L i glukoza 2 gramy/L) oraz rurki doprowadzające składniki odżywcze są sterylizowane przez autoklawowanie.
  2. Zaszczepianie reaktora z przepływem kroplowym odbywa się poprzez umieszczenie reaktora na płask....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biofilmy hodowane w różnych reaktorach często mają różne cechy, a każdy reaktor ma inne zastosowania. W niniejszej pracy opisano zastosowanie dwóch reaktorów biofilmu: reaktora biofilmu z przepływem kroplowym i reaktora z dyskiem obrotowym. Reaktory z przepływem kroplowym są przydatne do hodowli biofilmów o niskim ścinaniu na granicy faz powietrze-ciecz i można je dostosować do różnych warunków. Uważamy, że są one niezwykle wygodne w badaniach, w których pożądana jest duża ilość biomasy biofilmu. Taką konfigurację moż.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Grant NIAID K22AI081748.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Reaktory z przepływem kroplowymBioSurface Technologies CorporationDFR 110
Reaktory z obrotowym dyskiemBioSurface Technologies Corporation

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Costerton, J. W., Lewandowski, Z., Caldwell, D. E., Korber, D. R., Lappin-Scott, H. M. Microbial Biofilms. Annu. Rev. Microbiol. 49, 711-745 (1995).
  2. Costerton, J. W., Cheng, K. J., Gessey, G. G., Ladd, T. I., Nickel, J. C., Dasgupta, M., Marrie, T. J. Bacterial biofilms in nature and disease. Ann. Rev. Microbiol. 41

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Staphylococcus aureus BiofilmDrip Flow ReactorRotating Disk ReactorBiofilm FormationScanning Electron MicroscopyColony Forming UnitsFlow Rate ControlBiomass QuantificationAntimicrobial TestingCoupon Harvesting

Related Articles