Artykuł metodologiczny

Ocena wychwytu nanocząsteczek w guzach w czasie rzeczywistym z wykorzystaniem obrazowania intravitalnego

DOI:

10.3791/2808

⸱

21 czerwca 2011

 ,  ,  ,  , 
1Department of Medical Biophysics, University of Western Ontario, 2London Regional Cancer Program, London Health Science Centre, 3Department of Pathology, Vanderbilt University , 4Translational Prostate Cancer Research Group, London Health Science Centre

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Przedstawiamy nowatorskie podejście do ilościowego określania lokalizacji nanocząsteczek w naczyniach krwionośnych ludzkich guzów ksenoprzeszczepionych z wykorzystaniem dynamicznego obrazowania intravitalnego w czasie rzeczywistym w modelu zarodka ptaka.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Obecne technologie obrazowania nowotworów, takie jak USG, MRI, PET i CT, nie są w stanie dostarczyć obrazów o wysokiej rozdzielczości niezbędnych do oceny wychwytu nanocząsteczek w guzach na poziomie mikroskopowym1,2,3, co podkreśla użyteczność odpowiedniego modelu ksenoprzeszczepu do przeprowadzania szczegółowych analiz wychwytu. W niniejszej pracy wykorzystujemy obrazowanie intravitalne o wysokiej rozdzielczości do oceny wychwytu nanocząsteczek w ludzkich ksenoprzeszczepach nowotworowych w zmodyfikowanym modelu zarodka kurczaka bez skorupki. Model zarodka kurczaka jest szczególnie odpowiedni do tych analiz in vivo , ponieważ wspiera wzrost ludzkich nowotworów, jest stosunkowo tani i nie wymaga znieczulenia ani operacji 4,5. Komórki nowotworowe tworzą w pełni unaczynione ksenoprzeszczepy w ciągu 7 dni po implantacji w błonę chorioallantoiczną (CAM) 6. Powstałe guzy są wizualizowane za pomocą nieinwazyjnego obrazowania w czasie rzeczywistym o wysokiej rozdzielczości, które może być kontynuowane przez maksymalnie 72 godziny przy niewielkim wpływie na systemy gospodarza lub nowotworu. Nanocząsteczki o szerokim zakresie rozmiarów i formulacji, podane w miejscu oddalonym od guza, mogą być wizualizowane i ilościowo określane podczas przepływu przez krwiobieg, ekstrawazacji z nieszczelnego unaczynienia guza i akumulacji w miejscu nowotworu. Opisujemy tutaj analizę nanocząsteczek pochodzących z wirusa mozaiki fasoli (CPMV) znakowanych bliskopodczerwonymi barwnikami fluorescencyjnymi i/lub polimerami glikolu polietylenowego (PEG) 7, 8, 9,10,11. Po podaniu dożylnym te wirusowe nanocząsteczki są szybko internalizowane przez komórki śródbłonka, co skutkuje globalnym znakowaniem naczyń krwionośnych zarówno poza guzem, jak i w jego obrębie7,12. PEGylacja wirusowych nanocząsteczek zwiększa ich okres półtrwania w osoczu, wydłuża czas ich krążenia, a w konsekwencji wzmacnia ich akumulację w nowotworach poprzez efekt zwiększonej przepuszczalności i retencji (EPR) 7, 10,11. Szybkość i stopień akumulacji nanocząsteczek w guzie są mierzone w czasie przy użyciu oprogramowania do analizy obrazu. Technika ta zapewnia metodę zarówno wizualizacji, jak i ilościowego określania dynamiki nanocząsteczek w ludzkich nowotworach.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Inokulacja guza do błony kosmiankowej (CAM) zarodka ptaka

  1. Przygotować zapłodnione zarodki kurcząt pozbawione skorup zgodnie z opisem8.
  2. W 9. dniu rozwoju embrionalnego złożyć mikroinżektor, używając igły o rozmiarze 18G połączonej ze strzykawką 1 mL. Odciąć fragment rurki Tygon o długości 5-6 cali (średnica wewnętrzna 1/32", średnica zewnętrzna 3/32", grubość ścianki 1/32") i ostrożnie wsunąć ścięte ostrze igły do rurki. Z końcówki igły powinno wystawać około 4-5 cali rurki (Rysunek 1a).
  3. Napełnić strzykawkę i rurkę zawiesiną komórkową. Następnie wprowadzić szklaną igłę do mikroiniekcji na koniec rurki i ostrożnie usunąć wszelkie pęcherzyki powietrza.
  4. Wstrzyknąć w zarodki w 9. dniu (Rysunek 1b) pod mikroskopem stereoskopowym z oświetlaczem 10 000-100 000 komórek nowotworowych w formie bolusa do błony CAM (Rysunek 1c). Powoli wstrzykiwać komórki, dbając o to, aby igła znajdowała się w odpowiednim miejscu, tak aby komórki utworzyły widoczny bolus w obrębie CAM. Komórki, które skapią na powierzchnię CAM, można usunąć za pomocą chusteczki Kimwipe lub innego aplikatora.
  5. Przenieść zarodki z powrotem do inkubatora z nawilżaczem w temperaturze 38°C i wilgotności 60% i pozwolić na wzrost oraz unaczynienie guza (do 7 dni).

2. Przygotowanie nanocząsteczek

  1. Aby przygotować fluorescencyjnie znakowane nanocząstki CPMV do wstrzyknięcia do zarodka kurczaka, należy rozcieńczyć nanocząstki wirusowe (zsyntetyzowane zgodnie z metodą 8) w PBS o pH 7.4 do stężenia 100 μg/ml. Przed użyciem mieszaninę należy dokładnie wymieszać w wstrząsarze vorteksowym i odwirować przez jedną minutę w celu usunięcia ewentualnych agregatów. W zależności od koniugatów i stopnia agregacji pomocne może być również zastosowanie sonikacji. Zapasy fluorescencyjnie znakowanych CPMV są stabilne przez co najmniej 1 rok przy przechowywaniu w temperaturze 4°C w ciemności. Stan zapasów należy okresowo sprawdzać, nakładając kilka kropli na szkiełko przedmiotowe i weryfikując obecność fluorescencji. Do określenia, czy cząstki pozostały nienaruszone po koniugacji, można również wykorzystać transmisyjną mikroskopię elektronową (TEM).
  2. Krótko mówiąc, jeden mikrogram nanocząstek wirusowych (w końcowej objętości 2 μl) można nanieść na siatki pokryte miedzią. Następnie należy dodać taką samą objętość 2% octanu uranylu na 1 minutę przed badaniem w mikroskopie elektronowym (Philips EM 410).

3. Dożylne wstrzyknięcie wirusowych nanocząsteczek znakowanych fluorescencyjnie

  1. W 16. dniu zmontuj mikroinkubator zgodnie z powyższym opisem. Pobierz pożądaną objętość nanocząsteczek wirusowych przez cewkę do strzykawki (> 200 μL). Ostrożnie usuń wszelkie pęcherzyki powietrza. Włóż szklaną igłę do mikroiniekcji na koniec cewki. Upewnij się, że igła jest tak długa i zwężona, jak to możliwe (Rycina 2a). Jeśli igła będzie zbyt tępa, nie przebije się przez ektodermę i nie spenetruje naczynia. Jeśli igła będzie zbyt ostra, końcówka ulegnie zmiażdżeniu podczas penetracji tkanki.
  2. Wstrzyknij dożylnie 100 μl 1 mg/ml dekstranu z fluoresceiną (MW 70,000 Da, Invitrogen) do zarodka z nowotworem, w miejscu oddalonym od obszaru przeznaczonego do wizualizacji (Rycina 3d). Poprawną kaniulację żyły CAM potwierdza znikanie krwi na drodze przepływu iniekcji (Rycina 2b). Oceń przeciek naczyniowy 1 godzinę po wstrzyknięciu.
  3. Wstrzyknij dożylnie 50 μl roztworu 1 mg/ml CPMV-Alexa Fluor 647 (CPMV-AF 647) lub PEGylowanego CPMV-Alexa Fluor 647 (CPMV-PEG-AF 647) do zarodków z nowotworami wykazującymi przeciek naczyniowy, w miejscu oddalonym od obszaru przeznaczonego do wizualizacji.
  4. Wykonaj obrazowanie nowotworów natychmiast oraz co godzinę po wstrzyknięciu, używając mikroskopu pionowego Zeiss Examiner Z1 wyposażonego w dysk wirujący Yokogawa oraz kamerę EM-CCD Hamamatsu ImagEM 9100-12.

4. Obrazowanie intravitalne w czasie rzeczywistym

  1. Aby złożyć moduł do obrazowania zarodków, nałożyć cienką warstwę smaru próżniowego na obwód portu obrazowania znajdującego się na spodzie pokrywy modułu, a następnie dopasować szklaną lamkę okrywną o średnicy 18 mm do portu.
  2. Ułożyć zarodek w taki sposób, aby lamka okrywna zakryła wybrany obszar do obrazowania. Powoli opuszczać pokrywę, aż lamka okrywna zetknie się z zarodkiem, a następnie przykręcić pokrywę do modułu, aby ją unieruchomić (Rycina 2c).
  3. Wlać wodę podgrzaną do 37°C do modułu do obrazowania zarodków, poza naczynie zawierające zarodek, a następnie umieścić cały moduł na stoliku pionowego mikroskopu konfokalnego z wewnętrzną komorą środowiskową ustabilizowaną w temperaturze 37°C.
  4. Umieścić moduł do obrazowania zawierający zarodek pod konfokalnym mikroskopem fluorescencyjnym z dyskiem obrotowym (Rycina 2e). Moduł do obrazowania unieruchomi zarodek i utrzyma stałe pole widzenia podczas rejestracji obrazów, co umożliwi wykonanie zarówno trójwymiarowych stosów Z, jak i obrazów time-lapse. Trójwymiarowe obrazy time-lapse pozyskujemy i analizujemy przy użyciu pakietu oprogramowania Volocity firmy Perkin Elmer (dawniej Improvision) (Rycina 3a). Należy zarejestrować wysokorozdzielczy trójwymiarowy stos guza i otaczających go naczyń krwionośnych, aby przeprowadzić szczegółowe analizy strukturalne w określonych punktach czasowych. Trójwymiarowe stosy należy rejestrować w regularnych odstępach czasu, aby zmapować szczegółowe zmiany strukturalne w unaczynieniu guza. Obrazowanie guzów przeprowadzać co godzinę po iniekcji.
  5. Ilościowo określić pobór nanocząsteczek wirusowych, obliczając średni sygnał Alexa Fluor (AF) 647 w wybranych obszarach guza lub w zrębie (obszarze pozaguzowym) przy użyciu oprogramowania do kwantyfikacji obrazu, takiego jak Volocity (Perkin Elmer). Stosunek guza do zrębu obliczono, dzieląc średni sygnał AF 647 w guzie przez średni sygnał AF 647 w zrębie. Stosunek guz/zrąb wyższy niż 1 wskazuje, że nanocząsteczki są pobierane przez guz.

5. Reprezentatywne wyniki:

W opisanym tutaj przykładzie wstrzyknięto komórki raka jelita grubego HT-29, aby utworzyć bolus o wielkości około 1mm w obrębie CAM 9-dniowych zarodków kurzych (Rycina 1b). Po inokulacji zarodki hodowano przez 7 dni w inkubatorze z nawilżaczem, aby umożliwić wystarczający wzrost i unaczynienie guza (Rycina 1c). Zarodkom podano dożylnie dekstran o niskiej masie cząsteczkowej w celu potwierdzenia unaczynienia guza, a następnie guzy uwidoczniono pod mikroskopem pionowym Zeiss AxioExaminer Z1 (Rycina 2d).

Po dożylnym podaniu nanocząsteczek CPMV-AF 647 lub CPMV-PEG-AF 647 (Rycina 3a i b), wysokorozdzielcza obrazowanie konfokalne w czasie rzeczywistym (Rycina 2e) wykazało, że zarówno nanocząsteczki CPMV, jak i CPMV-PEG szybko znakowały całe układ naczyniowy, jednak pobranie CPMV-PEG przez guz było około 3 razy wyższe niż w przypadku CPMV po 12 godzinach (Rycina 3a). Względne pobranie nanocząsteczek przez guz określono za pomocą oprogramowania do analizy obrazu (Volocity firmy Perkin Elmer). Wybrano obszary zainteresowania w obrębie guza oraz poza nim (w części zrębowej), a następnie wyznaczono średnią intensywność fluorescencji dla każdego z nich. Dane przedstawiono jako stosunek guza do zrębu.

Układ do wstrzykiwania mikroiłkami w badaniu embrionalnym; strzykawka, cewka; obserwacja wzrostu embrionalnego.
Rycina 1.Mikroiniekcja guzów do błony żółtkowo-allantoisowej (CAM) zarodka ptaka. (a) Aparatura do mikroiniekcji jest zmontowana z elementów wskazanych na schemacie. (b) Zarodki ptaków w 9. dniu są gotowe do inokulacji guzem, gdy CAM rozprzestrzeni się, pokrywając całą powierzchnię. (c) W 16. dniu guz urośnie do średnicy 1 cm (linia przerywana) i będzie gotowy do wstrzyknięcia nanocząsteczek.

Mikroiniekcja do siatkówki, detekcja guza, układ mikroskopowy, obrazowanie fluorescencyjne, analiza optyczna.
Rysunek 2.Iniekcja nanocząsteczek i obrazowanie intravitalne. Iniekcja pod mikroskopem sekcyjnym przedstawiająca (a) końcówkę igły mikroiniektora gotową do podania do żyły błony chorioallantoicznej (CAM) oraz (b) igłę mikroiniektora wprowadzoną do żyły (wskazaną strzałką) i nanocząsteczki wstrzyknięte do krwiobiegu (widoczne jako przejaśnienie krwi). (c) Jednostka obrazowania zawierająca embrion ptaka z szkiełkiem podstawowym przylegającym bezpośrednio do CAM. (d) Przed iniekcją nanocząsteczek unaczynienie guza jest oceniane za pomocą obrazowania intravitalnego po podaniu dekstranu z fluoresceiną. (e) Jednostka obrazowania zawierająca embrion umieszczony na stoliku pionowego mikroskopu konfokalnego w komorze z regulowaną temperaturą ustawioną na 37°C.

Obrazy mikroskopowe przedstawiające guzy CPMV i CPMV-PEG; wykres słupkowy porównuje intensywność Alexa Fluor 647.
Rysunek 3.Wizualizacja intrawitalna pobierania nanocząsteczek przez guzy ludzkie. Guzy zwizualizowano 7 godzin po wstrzyknięciu (a) CPMV-AF647 oraz (b) CPMV-PEG-AF647. d) Wycięcie guza z zarodka ptaka w celu przeprowadzenia dalszych analiz.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Błona pozarodłowa (CAM) embrionu ptaka jest użytecznym modelem do oceny dynamiki naczyniowej i farmakokinetyki ludzkich guzów. Struktura i położenie CAM umożliwiają wysokiej jakości akwizycję obrazów i pozwalają na implementację wielu rodzajów ksenoprzeszczepów nowotworowych bez konieczności przeprowadzania inwazyjnych procedur chirurgicznych. Ponadto ksenoprzeszczepy nowotworowe zaimplantowane w błonę pozarodłową ulegają unaczynieniu w ciągu 7 dni, oferując szybki, niedrogi i półwysokoprzepustowy sposób oceny akumulacji nanocząsteczek w tkance nowotworowej. Ponieważ ksenoprzeszczepy nowotworowe zaimplantowane w CAM bezskorupkowych zarodków kurzych są dostępne dla optyki o wysokiej rozdzielczości pionowego mikroskopu epifluorescencyjnego lub konfokalnego, można łatwo uzyskać kontekstowe i czasowe informacje dotyczące poboru nanocząsteczek przez unaczynienie guza. Ksenoprzeszczepy nowotworowe w tym modelu mają tendencję do wzrostu bocznego w obrębie CAM, co skutkuje powstaniem guzów, które są duże, ale ich głębokość pozostaje mniejsza niż 200 µm. Dzięki temu są one szczególnie odpowiednie do obrazowania intravitalnego, ponieważ standardowe mikroskopy epifluorescencyjne mogą efektywnie penetrować całą masę guza. W przeciwieństwie do tego, guzy zaimplantowane w miejscach powierzchownych lub ortotopowych u myszy proliferują trójwymiarowo, co utrudnia dokładną lokalizację nanocząsteczek głęboko wewnątrz tych guzów za pomocą technik nieinwazyjnych. Wykorzystaliśmy ten model do oceny poboru kropek kwantowych, liposomów i nanocząsteczek tlenku żelaza w kilku ludzkich ksenoprzeszczepach nowotworowych, wskazując na potencjał tego modelu do analizy in vivo szerokiej gamy formulacji nanocząsteczek.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nie zgłoszono żadnych konfliktów interesów.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Badanie to było wspierane przez grant CCSRI nr 700537 oraz grant CIHR nr 84535 dla JDL oraz granty NIH/NCI nr CA120711-01A1 i CA120711-01A1 dla AZ. Wszystkie eksperymenty zostały przeprowadzone zgodnie z regulacjami i wytycznymi Institutional Animal Care and Use Committee na University of California San Diego oraz Animal Care and Use na University of Western Ontario.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Zapłodnione jaja kurcząt rasy leghornFrey`s Hatchery, St. JacobsNie dotyczy
narzędzie rotacyjne DremelDremelMożna użyć dowolnego modelu
tarcze tnące Dremel nr 36 Dremel409
Inkubator SportsmanBerry Hill1550HA
Inkubator Sportsman Berry Hill1502EA
Etanol70% (obj./obj.)
Łódeczki wagowe polistyrenowe VWR international12577-01
Kwadratowe szalki PetriegoSimport25378-115
Gumowy pojemnik Rubbermaid z pokrywką GuillevinRH3-228-00-BLUotwory wywiercone w ściankach bocznych
Pionowa wyciągarka do pipetInstrumenty David Kopfmodel 720Ustawienia: 16,3 (grzałka) i 2,3 (elektrozawór)

Kapilary szklane borokrzemianowe sodowe

Sutter Instrument Co.BF100-58-10

(średnica zewnętrzna 1,0 mm; średnica wewnętrzna 0,58 mm; 10 cm)

długość)
1X Dulbecco’podłoże DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)Invitrogen11995073
Dulbecco’s Invitrogen14190250pH 7,4
bufor fosforanowy (D-PBS) (1X), ciecz
Trypsyna, 0,05% (1X) z EDTA 4Na, roztwórInvitrogen25300054
Płodowa surowica bydlęcaInvitrogen12483-020Inaktywacja termiczna
Komora countingowa (hemocytometr)Hausser Scientific15170-090
WirówkaEppendorf5811 000.010
Pęseta precyzyjnaVWR international25607-856
przewód Tygon R-3603 VWR international63009-98350 ft (średnica wewnętrzna 1/32 cala, średnica zewnętrzna 3/32 cala, grubość ścianki 1/32 cala)
Igły podskórne do zastrzyków, igły o rozmiarze 18GBD Biosciences305195Opakowanie 100 szt.
strzykawki 1 ml do iniekcjiBD Biosciences309602Opakowanie 100 sztuk
Oświetlacz do mikroskopu światłowodowegoAmscopeHL250-AY150 W
chusteczki KimwipesVWR international10805-905
V. unguiculata nasiona (California black-eye no. 5)Burpee51771A
Lampy do uprawy wewnątrz pomieszczeńSunLite, Gardener’zaopatrzenie
ester metylo-PEO4-NHSPierce, Thermo ScientificPI22341
mPEG-NHS, ester sukkcynimidylowy PEG, MW 2000NANOCSPEG1-0002
kwas karboksylowy Alexa Fluor 647 (ester sukcynimidylowy)InvitrogenA20006
ester succinimidy Oregon Green 488 * izomer 6 *InvitrogenO-6149
Dimetylosulfotlenek (DMSO)Sigma-AldrichD8418
Fosforan jednowodorowy dwuzasadowySigma-Aldrich379980K2HPO4 (do buforu fosforanowego)
Wodorofosforan potasu jednowodny P5655KH2PO4 (do buforu fosforanowego)
kolumna do chromatografii wykluczania Superose 6GE Healthcare17-0673-01
ÄChromatograf KTA Explorer 100GE HealthcareWS-AKTA100
Äzestaw wysokoprzepływowy KTAGE Healthcare18-1154-85
Sacharoza Sigma-AldrichS0389
UltrawirówkaBeckman Coulter Inc.
rotor SW 28 TiBeckman Coulter Inc.342204Wirówka z koszem z wahadłowymi uchwytami
rotor 50.2 TiBeckman Coulter Inc.337901Kąt stały
Centryfugowe jednostki filtrujące Amicon Ultra-15 EMD MilliporeUFC910008próg odcięcia 100 kDa
Generator gradientuBio-Rad
dekstran, fluoresceina, 70 000 MW, anionowyInvitrogenD1823
Konfokalny mikroskop fluorescencyjny z dyskiem obrotowymQuorum TechnologiesBrak danych
Mikroskop epifluorescencyjny szerokopolowy Quorum; Zeiss Axio Examiner, ZeissNie dotyczy
Kamera EM-CCD Hamamatsu ImagEM 9100-12Quorum; HamamatsuNie dotyczy
Komora temperaturowa do mikroskopu Tworzywa precyzyjneNie dotyczy
Smar próżniowy VWR international59344-055
Okrągłe szkiełka nakrywkowe nr 1 (18 mm)VWR international16004-300
oprogramowanie VolocityPerkinElmer, Inc.
Obudowa zarodka kurczakawykonany na zamówienie
Nożyczki precyzyjneVWR international25608-203
FormalinaBioShop CanadaFOR201.500Stosować w dygestorium
Optymalne cięcie Fisher Scientific1437365
Temperatura (OCT)
Formy plastikoweFisher Scientific22-038217
szkiełka przylepne VWR VistaVision HistoBondVWR International16004-406
Barwienie Prolong Gold z użyciem DAPIInvitrogenP36931
Jednorazowe noże do kriostatuFisher Scientific12-634-2
KriostatLeica Microsystems14047033518

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Halin, C., Mora, J. R., Sumen, C., von Andrian, U. H. In vivo imaging of lymphocyte trafficking. Annu Rev Cell Dev Biol. 21, 581-603 (2005).
  2. Judenhofer, M. S. Simultaneous PET-MRI: a new approach for functional and morphological imaging. Nat Med. 14, 459-465 (2008).
  3. Weissleder, R., Pittet, M. J. Imaging in the era of molecular oncology. Nature. 452, 580-589 (2008).
  4. Chambers, A. F., Ling, V. Selection for experimental metastatic ability of heterologous tumor cells in the chick embryo after DNA-mediated transfer. Cancer Res. 44, 3970-3975 (1984).
  5. Cretu, A., Fotos, J. S., Little, B. W., Galileo, D. S. Human and rat glioma growth, invasion, and vascularization in a novel chick embryo brain tumor model. Clin Exp Metastasis. 22, 225-236 (2005).
  6. Zijlstra, A., Lewis, J., Degryse, B., Stuhlmann, H., Quigley, J. P. The inhibition of tumor cell intravasation and subsequent metastasis via regulation of in vivo tumor cell motility by the tetraspanin CD151. Cancer cell. 13, 221-234 (2008).
  7. Lewis, J. D. Viral nanoparticles as tools for intravital vascular imaging. Nature medicine. 12, 354-360 (2006).
  8. Leong, H. S. Intravital imaging of embryonic and tumor neovasculature using viral nanoparticles. Nature protocols. 5, 1406-1417 (2010).
  9. Chatterji, A. New addresses on an addressable virus nanoblock; uniquely reactive Lys residues on cowpea mosaic virus. Chemistry & biology. 11, 855-863 (2004).
  10. Brunel, F. M. Hydrazone ligation strategy to assemble multifunctional viral nanoparticles for cell imaging and tumor targeting. Nano letters. 10, 1093-1097 (2010).
  11. Steinmetz, N. F., Manchester, M. PEGylated viral nanoparticles for biomedicine: the impact of PEG chain length on VNP cell interactions in vitro and ex vivo. Biomacromolecules. 10, 784-792 (2009).
  12. Steinmetz, N. F., Cho, C. F., Ablack, A., Lewis, J. D., Manchester, M. CPMV nanoparticles target surface vimentin on cancer cells. Nanomedicine. , Forthcoming (2010).

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Ksenoprzeszczepy guz wmodel zarodka kurczakab ona chorioallantoicznamikroskopia konfokalnafluorescencyjne nanocz steczkinanocz steczki PEGylizowanezwi kszony efekt przenikalno ci i retencjiobrazowanie w czasie rzeczywistym

Powiązane artykuły