$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Analiza śladu
- Ustawianie pasa startowego (rysunek 1A)
- Wytnij kawałek białego papieru (29,7 cm x 42 cm x 0,09 mm) wzdłuż na trzy odcinki o równej szerokości. Połóż na stole kawałek białego papieru (9,9 cm x 42 cm).
- Umieść ciemne pudełko na bramkę na dystalnym końcu papieru. Umieść inne pudełka (mniej więcej tej samej długości co papier) ze ścianami po obu stronach pasa startowego, zapobiegając ucieczce myszy.
- Umieść atrament i czerwony atrament na oddzielnych szalkach Petriego (o średnicy 35 mm).
2. Sesja treningowa
UWAGA: Wykonuj sesję treningową dopiero w wieku 4 tygodni.
- Połóż mysz na bliższym końcu kartki (skieruj głowę w stronę pola bramki). Pozwól myszy przejść od bliższego końca do pola bramkowego. Usuń mysz z pola bramki. Jeśli mysz zatrzyma się na papierze, delikatnie popchnij mysz palcem do pola bramki.
- Przytrzymaj mysz, chwytając kark między kciukiem a palcem wskazującym, aby ograniczyć ruch kończyn przednich. Następnie chwyć grzbiet i ogon między kłębkiem kciuka a pozostałymi palcami, aby ograniczyć ruch kończyn tylnych.
nuta: Niewystarczające trzymanie myszy powoduje powstawanie plam atramentu na ubraniu.
- Zanurz spody kończyn przednich w czerwonym tuszu, a spody kończyn tylnych w czarnym tuszu. Natychmiast umieść mysz na bliższym końcu papieru (skieruj głowę w stronę pola bramki). Pozwól myszy przejść od bliższego końca do pola bramkowego. Jeśli mysz zatrzyma się na papierze, delikatnie popchnij mysz palcem do pola bramki.
- Usuń mysz z pola bramki. Przejdź do sesji testowej.
3. Sesja testowa
- Po sesji treningowej przygotuj pas startowy dla odcisków stóp za pomocą nowego wyciętego kawałka białego papieru.
- Przytrzymaj mysz, chwytając kark między kciukiem a palcem wskazującym, aby ograniczyć ruch kończyn przednich. Następnie chwyć plecy i ogon między kłębkiem kciuka a pozostałymi palcami, aby ograniczyć ruch tylnych kończyn.
- Zanurz spody kończyn przednich w czerwonym tuszu, a spody kończyn tylnych w czarnym tuszu. Natychmiast umieść mysz na bliższym końcu papieru. Niech mysz przejdzie od bliższego końca do pola bramkowego.
UWAGA: Ponieważ myszy preferują ciemność, chodzenie staje się stabilniejsze, gdy mysz zbliża się do ciemnego pola bramki. Jeśli mysz zatrzyma się na papierze, delikatnie popchnij mysz palcem do pola bramki. Następnie, jeśli wiarygodne ślady nie zostaną uzyskane do analizy, ponieważ mysz się zatrzymała, spróbuj ponownie uruchomić sesję testową.
- Wróć myszką do klatki domowej z pola bramkowego. Wyczyść skrzynkę bramkową 70% etanolem po każdej sesji testowej. Wysuszyć na powietrzu papier z nadrukiem na stopce.
4. Analiza śladów stóp
- Uzyskaj trzy pomiary każdego parametru (długość kroku kończyn przednich i tylnych, szerokość podstawy przedniej i tylnej, zachodzenie kończyn przednich i tylnych, rysunek 1B) linijką z papieru drukowanego stopą.
nuta: Ponieważ ślady stóp na bliższych i dalszych końcach często wykazują duże różnice z powodu zatrzymywania się lub biegu, wybierz część ze stałym wzorcem chodu. Środkowa część papieru z nadrukiem na stopce zwykle nadaje się do analizy.
- Aby uzyskać długość kroku, zmierz odległości między tymi samymi częściami łapy (np. opuszką łapy lub palcem).
- Dla szerokości podstawy przedniej narysuj linię pomiędzy kolejnymi prawymi (lub lewymi) obrysami frontu. Następnie zmierz długość linii pionowej od pola lutowniczego lewego (lub prawego) przedniego footprintu do linii narysowanej pomiędzy prawymi (lub lewymi) footprintami.
- Aby uzyskać szerokość tylnej podstawy, narysuj linię między kolejnymi prawymi (lub lewymi) śladami tylnych stóp. Następnie zmierz długość linii pionowej od pola lewego (lub prawego) tylnego śladu do linii narysowanej między prawymi (lub lewymi) śladami stóp.
- W przypadku nakładania się zmierz odległość między padami lewych (lub prawych) przednich i tylnych śladów.
- Uśrednij trzy pomiary dla każdej osoby. Do analizy statystycznej należy użyć indywidualnej średniej każdego parametru.
- Dla długości kroku użyj średniej z poszczególnych średnich kroków w lewo i w prawo.
- W przypadku asymetrii długości kroku należy użyć wartości bezwzględnej różnicy między indywidualnymi średnimi długościami kroku kończyny lewej i prawej.
- Do analizy statystycznej pozostałych parametrów (szerokość podstawy z przodu, szerokość podstawy z tyłu i zakładka) należy użyć bezpośrednio średniej indywidualnej.
