$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące zwierząt zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.
1. Dootrzewnowe wstrzykiwanie komórek
UWAGA: W naszych eksperymentach, myszy są obsługiwane w komorze laminarnego przepływu powietrza lub w komorze bezpieczeństwa biologicznego w naszym obiekcie barierowym, aby ograniczyć ryzyko narażenia na patogeny. Aby wyraźnie zademonstrować tę technikę, procedury przedstawione w załączonym filmie zostały przeprowadzone w laboratorium zatwierdzonym do pracy na zwierzętach. Ta konkretna technika nie wymaga znieczulenia zwierząt. Zgodnie z zatwierdzonymi protokołami należy wykonywać tę technikę na żywych zwierzętach. Do tego badania należy użyć odpowiednich szczepów myszy. Na przykład: użyj nagich myszy z obniżoną odpornością do badania kolonizacji ludzkich komórek raka jajnika (SKOV3ip.1 i HeyA8); użyć immunokompetentnych myszy C57BL / 6 do badania kolonizacji mysich komórek raka jajnika (ID8).
- Załadować 500 μl zawiesiny jednokomórkowej komórek raka jajnika do strzykawki i umieścić w sterylnej igle 25 G. Zmniejsza to ścinanie komórek przed wstrzyknięciem.
- Podnieś mysz za kark i przytrzymaj ogon za pomocą dłoni i palca wskazującego, a następnie umieść lewą tylną nogę między palcem serdecznym a małym (gdy mysz jest skrępowana lewą ręką).
UWAGA: Aby uniknąć urazu narządów jamy brzusznej, należy dobrze przytrzymać mysz, aby nie mogła się poruszać podczas wstrzyknięcia.
- Wyobraź sobie linię w poprzek brzucha tuż nad kolanami i zlokalizuj punkt po prawej stronie zwierzęcia i blisko linii środkowej. Punkt wejścia znajduje się w czaszce i lekko przyśrodkowo w stosunku do ostatniego sutka.
nuta: Wkłucie igły po prawej stronie myszy pozwala uniknąć jelita ślepego i zmniejsza ryzyko przebicia jelit.
- Wbić igłę w dolną boczną część brzucha myszy na głębokość około 0,5 cm. Pociągnąć tłok do tyłu, aby upewnić się, że igła nie przebiła naczynia krwionośnego lub innych narządów otrzewnej.
- W przypadku zasysania płynu należy wyrzucić strzykawkę (i próbkę). Zielonkawo-brązowy lub żółty aspirat wskazuje odpowiednio na penetrację igły odpowiednio do jelit lub pęcherza.
- Wstrzykiwać próbkę pod powolnym, stałym ciśnieniem. Wyjmij igłę i umieść mysz z powrotem w klatce. Nie należy ponownie zamykać strzykawki przed umieszczeniem jej w ostrym pojemniku.
- Ofiaruj myszy poprzez uduszenie CO2 i usunięcie ważnych narządów w określonym momencie po wstrzyknięciu.