Zbieranie otrzewnowych magazynów tłuszczu: technika badania kolonizacji tkanki tłuszczowej otrzewnej rakiem jajnika w modelach mysich

Streszczenie

Źródło: Krishnan, V. et al. In Vivo i podejścia ex vivo do badania przerzutowej kolonizacji raka jajnika struktur mlecznej w tkance tłuszczowej otrzewnej. J. Vis. Exp. (2015)

W tym filmie używamy modelu myszy poddanej eutanazji z rakiem jajnika. Następnie opisujemy protokół identyfikacji i ekstrakcji magazynów tłuszczu lub tkanki tłuszczowej związanej z pięcioma pierwotnymi narządami otrzewnej w celu zbadania kolonizacji przerzutowych komórek rakowych.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowanie zwierząt do badań eksperymentalnych

1. Umożliwienie zwierzętom zaaklimatyzowania się w nowym pomieszczeniu i środowisku, w celu odzyskania sił po potencjalnych fizjologicznych skutkach transportu i obchodzenia się z nimi.
   nuta: Poniższa technika ma zastosowanie do wszystkich dostępnych na rynku szczepów myszy. Liczba zwierząt, które mają być wykorzystane w doświadczeniu, zależy od projektu badania i powinna być dokonana po konsultacji ze statystykiem.

2. Identyfikacja i izolacja otrzewnowych magazynów tłuszczu

1. Eutanazja zwierząt poprzez przedawkowanie CO₂ i wtórną metodę fizyczną w celu potwierdzenia śmierci.
2. Ponieważ pobieranie zapasów tłuszczu otrzewnowego stanowi usunięcie narządów wewnętrznych (metoda wtórna), należy wykonać nacięcie w linii środkowej w pobliżu brodawek pachwinowych przez ścianę otrzewnej, aby odsłonić narządy wewnętrzne (ryc. 1A).
3. W przypadku tłuszczu omentalnego (OM) należy odsłonić kompleks omentalno-trzustkowy, rozciągając śledzionę z jamy otrzewnej za pomocą kleszczy (ryc. 1C). Uwolnij sieć z trzustki i śledziony, ściśle przycinając wszystkie połączenia tkankowe. Upewnij się, że pozostała tkanka trzustki została wycięta.
4. W przypadku tłuszczu gonadalnego (GF) użyj kleszczy, aby podnieść tłuszcz gonadalny otaczający jajniki i wyciąć, przecinając połączenia tkankowe (ryc. 1A w prawym górnym rogu).
5. W przypadku tłuszczu macicznego (UF) użyj kleszczy, aby podnieść tłuszcz maciczny otaczający rogi macicy i wyciąć, przecinając połączenia tkankowe (ryc. 1A u dołu po prawej).
6. W przypadku tłuszczu krezkowego (MF) przetnij połączenie między jelitem cienkim a odźwiernikiem. Użyj kleszczy, aby mocno chwycić wolny koniec jelita cienkiego i powoli "oderwij" go od tłuszczu krezkowego. Uwolnij tłuszcz krezkowy z korzenia krezki za pomocą nożyczek preparujących (ryc. 1A w lewym dolnym rogu).
7. W przypadku tłuszczu splenoportalu (SF) podnieś dystalny koniec śledziony za pomocą kleszczy, aby odsłonić cienki pas tłuszczowy tkanki łączącej wnękę śledziony z trzustką. Wytnij tłuszcz splenoportal, najpierw uwalniając go z trzustki, a następnie ostrożnie wycinając go ze śledziony (ryc. 1B).

Wyniki

Rysunek 1. Względne lokalizacje i struktury głównych magazynów tłuszczu otrzewnej. orazGruba sekcja anatomiczna pokazująca względne położenie czterech z pięciu głównych źródeł tłuszczu otrzewnowego. Pokazano sieć (OM; zarysowano), tłuszcz gonadalny (GF), tłuszcz maciczny (UF), krezkę (MY), jajnik (ov), rogi macicy (uh) i jelito cienkie (si). (B) Tłuszcz splenoportal ...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Narzędzia do preparowania	Narzędzia naukowe	nie
Pbs	Corning	21-040-CV	Bez wapnia i magnezu