Ekstrakcja poszczególnych płatów z prostaty: technika zbierania pojedynczych płatów prostaty z prostaty myszy

Streszczenie

Źródło: Nath, D. et al. Identyfikacja, charakterystyka histologiczna i sekcja płatów prostaty myszy dla modeli hodowli sferoidalnych 3D in vitro. J. Vis. Exp. (2018)

Ten film opisuje technikę pobierania pojedynczych płatów z gruczołu krokowego modelu myszy. Poszczególne płaty można następnie wykorzystać do analizy histologicznej i badań nad rakiem.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące zwierząt zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Ogólna anatomia prostaty i mikrodysekcja poszczególnych płatów

UWAGA: To jest pokazane na rysunkach 1(i-n) i na rysunku 2

1. Odwróć tkankę za pomocą kleszczy tak, aby strona grzbietowa była skierowana do góry, pokazując płaty grzbietowe, które przypominają skrzydła motyla.
2. Zbierz płaty grzbietowe, przytrzymując płat kleszczami i przecinając podstawę nożyczkami (ryc. 1j).
3. Odwróć pozostałą tkankę na stronę brzuszną.
4. Zbierz płaty boczne, które są małe i zwykle owijają cewkę moczową z boku, które są zaklinowane między płatem przednim, brzusznym i grzbietowym (ryc. 1k).
5. Następnie zbierz płaty brzuszne, które są większe niż płaty boczne i leżą brzusznie na cewce moczowej (ryc. 1l).
6. Na koniec zbierz przednie płaty, największe z czterech, przecinając i odrzucając cewkę moczową (ryc. 1m).
7. Przetwarzaj kawałki tkanek zgodnie z potrzebami eksperymentalnymi.

Wyniki

Rycina 1: Rozwarstwienie prostaty myszy. Obrazy krok po kroku do wypreparowania prostaty myszy z PMG: (a) usuwanie tłuszczu, (b) usuwanie pęcherza moczowego, (c) usuwanie nasieniowodów, (d) widok brzuszny prostaty z cewką moczową, (e) widok grzbietowy prostaty z cewką moczową, (f-h) usuwanie pęcherz...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Instrumenty chirurgiczne dla myszy (zestaw do preparacji myszy)	Światowe instrumenty precyzyjne	MYSZ
Mikroskop preparacyjny
Średnie prędkości obrotowe	Thermofisher Naukowy	11875093
Pożywka preparcyjna (DMEM + 10% FBS)	Thermofisher Naukowy	11965-084
Surowica bydlęca płodu	Thermofisher Naukowy	10438018
PBS (sól fizjologiczna buforowana fosforanami)	Thermofisher Naukowy	10010031
Kolagenaza	Thermofisher Naukowy	17018029	Zrób 10x bulion (10 mg / ml) w RPMI, przefiltruj sterylizację, porcję i przechowuj w temperaturze -20 °C
Strzykawki i igły	Fisher Naukowy