Pobieranie próbek z pojedynczych komórek za pomocą mikromanipulacji: technika izolowania pojedynczych komórek z zawiesiny komórek rakowych

Abstract

Źródło: Chen S. et al. Wstępne wzbogacanie komórek docelowych i amplifikacja całego genomu dla charakterystyki pojedynczej komórki. J. Vis. Exp. (2018)

Ten film opisuje technikę izolowania pojedynczych komórek z puli komórek docelowych w celu przeprowadzenia dalszej analizy. W tej metodzie mikromanipulator zamontowany w mikroskopie służy do bardzo precyzyjnej izolacji pojedynczej komórki docelowej.

Protocol

1. Próbkowanie pojedynczej komórki

1. Mikromanipulacja
   UWAGA: Aby umożliwić dalsze zastosowania, takie jak analiza całego genomu (WGA), izolowane pojedyncze komórki zostaną dodane do 2 μl głównej mieszanki do lizy komórek. Przygotuj mieszankę wzorcową w zależności od liczby komórek do przetworzenia. Obliczyć dodatkowe objętości do strat spowodowanych pipetowaniem i umieścić główną mieszankę do lizy komórek na lodzie.
   1. Przygotować główną mieszankę do lizy komórek (składniki zestawu WGA, tabela materiałów i odczynników). Krótko wymieszać 2,0 μl buforu reakcyjnego, 1,3 μl oktyl....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (1x PBS)	Thermo Fisher Naukowy	Numer katalogowy 10010-015
Probówki próżniowe EDTA (lub Na-heparyna)	Bd	366450 (lub 366480)	Używany jako probówka reakcyjna do wychwytywania komórek docelowych ex vivo
Pipety Pasteura 150 mm	Wolak	Zobacz materiał D810	Służy do nakładania ogniw na małą objętość do C&R
Smarowidło	Dako Dako	S2002	Stosowany na szkiełkach do utrzymywania zawiesiny komórek na miejscu
Axiovert M200 wyposażony w Mikromanipulator MMJ i CellTram vario	Zeiss/Eppendorf		Korzystaj z mikromanipulacji pod ręką
Mikrokapilary (średnica 25 μm), CustomTip Type I	Eppendorf	930001201	Służy do mikromanipulacji komórkami
0,2 ml probówek do PCR	Biozym	Numer katalogowy: 710920