Artykuł metodologiczny

Charakterystyka funkcjonalnej chemooporności: metoda oceny lekooporności w komórkach nowotworowych za pomocą testu klonogennego

30 kwietnia 2023

W tym artykule

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Mohr, L. et al. Generacja modeli komórkowych raka prostaty oporności na środek antymitotyczny Docetaksel. J. Vis. Exp. (2017)

Ten film opisuje metodę oceny oporności na leki chemoterapeutyczne w komórkach raka prostaty za pomocą testu tworzenia kolonii. Test ten może być wykorzystany jako funkcjonalne narzędzie do identyfikacji nowych molekularnych i komórkowych mechanizmów chemooporności w komórkach nowotworowych.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Funkcjonalna charakterystyka nabytej odporności na docetaksel za pomocą testu tworzenia kolonii

UWAGA: W tym protokole, chemooporność została oceniona za pomocą testów tworzenia kolonii. Alternatywne metody stosowane do oceny żywotności komórek (tj. testy MTS) mogą być stosowane w oparciu o preferencje badaczy.

  1. Umieść 2,000 komórek (DU145 lub 22Rv1, zarówno rodzicielskich, jak i opornych na docetaksel) na dołku na płytkach 6-dołkowych, używając 2 ml pożywki na studzienkę.
  2. Po 24 godzinach dodać zwiększające się stężenia docetakselu (komórki rodzicielskie: 0,25, 0,5, 1, 2,5 i 5 nM; Ogniwa DR: 50, 125, 250, 500 i 1 000 nM). Dla obu linii komórkowych DU145 i 22Rv1. Dodać DMSO tylko do jednego dołka jako kontrolnego o tej samej objętości, co dla najwyższej dawki docetakselu.
  3. Po 72 godzinach odessać pożywkę zawierającą lek i dodać świeżą pożywkę wolną od docetakselu.
  4. Inkubuj płytki przez 1-2 tygodnie, aż kolonie będą widoczne pod mikroskopem.
  5. Aby zabarwić kolonie, umyj je delikatnie 2-3 ml PBS i inkubuj z 2-3 ml roztworu fioletu krystalicznego (0,1% w/v w 10% formalinie) przez 20 minut w kapturze do hodowli tkankowej lub dygestorium.
  6. Usunąć roztwór barwiący, umyć płytki 2-3 mlH2O, usunąćH2Oi wysuszyć płytki na powietrzu.
  7. Przeanalizuj wynik, wizualizując dołki i ręcznie licząc kolonie za pomocą markera (aby uniknąć dwukrotnego liczenia tych samych kolonii) i przedstaw procent żywotności komórek na wykresie. Wykonaj cyfrowe zdjęcia płyt w celu przedstawienia figury (Rysunek 1A).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Rycina 1: Charakterystyka funkcjonalna i fenotypowa modeli komórkowych opornych na docetaksel.(A) Reprezentatywne testy tworzenia kolonii komórek rodzicielskich i odpornych na docetaksel poddanych działaniu wskazanych stężeń docetakselu przez 72 godziny. Odsetek kolonii dla każdego stężenia poddanego działaniu substancji jest przedstawiony na dołączonym wykresie. Eksperymenty są trz...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Ogniwa DU145 Kontroler ATCC (Kontroler T Zobacz materiał HTB-81
Ogniwa 22Rv1 Kontroler ATCC (Kontroler TCRL-2505
Docetaksel Selleck Chemikalia Zobacz materiał S1148 w DMSO (10mM)
Kolba do hodowli tkankowych 150 cm kw. sokół355001
6-dołkowe płytki do hodowli tkankowych sokół353046
RPMI 1640 Średni Gibco (firma Gibco)11875093Uzupełniony 10% FBS i 1% Penicilin/Streptomycyna
Fundacja B Surowica bydlęca płodu Bliźnięta900208
1X sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS) Corning 21-040-CM
0,05% Trypsyna-EDTA Gibco (firma Gibco) 25300-062
Penicylina-Streptomycyna Gibco (firma Gibco)15140122
Kryształowy fiolet Sigma-AldrichZobacz materiał C0775
10% roztwór formaliny Sigma-AldrichHT501128
powiedział:

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Ocena oporno ci na lekitest tworzenia koloniikom rki raka prostatyleczenie docetakselemanaliza ywotno ci kom rekbarwienie fioletem krystalicznymmetoda liczenia koloniifunkcjonalny test oporno ci

Powiązane artykuły