Wszystkie procedury z udziałem ludzi zostały przeprowadzone zgodnie z instytucjonalnymi, krajowymi i międzynarodowymi wytycznymi dotyczącymi dobrobytu ludzi i zostały sprawdzone przez lokalną komisję rewizyjną instytucji.
1. Barwienie
- Przed przystąpieniem do barwienia zetrzyj nadmiar roztworów wokół chusteczki na szkiełku bibułą.
- Umieść szkiełka w warunkach temperatury pokojowej i wilgotności pokojowej, aby uniknąć wysuszenia tkanki na szkiełku przez cały proces barwienia.
- Utleniać szkiełka kilkoma kroplami nadmanganianu potasu przez 5 minut. Upewnij się, że objętość nadmanganianu potasu jest wystarczająca do pokrycia części tkanki na każdym szkiełku.
- Opłucz utlenione szkiełka wodą destylowaną w słoiku Coplin z 2-3 zmianami. Obserwuj niebieski kolor tkanki.
- Teraz wybiel te szkiełka, dodając kilka kropli kwasu szczawiowego przez 5 minut. Upewnij się, że objętość kwasu szczawiowego jest wystarczająca, aby całkowicie pokryć część tkanki na każdym szkiełku.
- Opłucz szkiełka, zanurzając je w słoiku Coplin wypełnionym wodą destylowaną. Wykonaj płukanie 2x-3x.
- Teraz umyj te szkiełka krótko w 95% alkoholu, a następnie zanurz je w roztworze elastyny (5 g/l) na 8-24 godziny < br />
nuta: Roztwór elastyny jest lotny, a jego czas barwienia jest stosunkowo długi, dlatego najlepiej zanurzyć szkiełka z elastycznym barwieniem w szczelnie zamkniętym pojemniku, takim jak przezroczysta szklana butelka z nakrętką uszczelniającą. Pojemność pojemnika i objętość roztworu elastyny zależy od liczby zanurzonych szkiełek, o ile umożliwia to całkowite zanurzenie wszystkich szkiełek.
- Zanurz te szkiełka bezpośrednio w 95% etanolu na 1-2 minuty, aby dobrze rozróżnić każdy fragment tkanki.
nuta: Różnicowanie odnosi się do zmiany ładunku części tkanki, która usuwa nadmiar zabarwienia wchłoniętego przez tkankę i sprawia, że kolory są wyraźniejsze. Po barwieniu roztworem elastyny próbek nie należy myć wodą destylowaną, aby uniknąć trudności w rozróżnieniu. W razie potrzeby sprawdź pod mikroskopem, czy nie ma niebiesko-czarnych elastycznych włókien i szarego tła. Lepiej jest nieco zaniżyć tkankę, ponieważ późniejsze przeciwbarwienie Van Giesona może również nieco usunąć elastyczną plamę.
- Po rozróżnicowaniu całkowicie spłukać szkiełka wodą destylowaną.
- Przeciwbarwić szkiełka w roztworze Van Giesona przez 1 min.
nuta: Objętość roztworu Van Giesona musi być wystarczająca, aby móc całkowicie zanurzyć wycinek tkanki na każdym szkiełku.
