Method Article

Sekcje, barwienie i obrazowanie TEM osadzonych egzosomów: protokół do wizualizacji cech strukturalnych egzosomów za pomocą TEM

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Jung, M. K. et al. Przygotowanie próbki i obrazowanie egzosomów za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej. J. Vis. Exp. (2018)

Ten film opisuje technikę przygotowania cienkiego odcinka osadzonych egzosomów. Sekcje te można następnie barwić i obrazować za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej (TEM) w celu zbadania cech strukturalnych egzosomów.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Podział egzosomów na sekcje

  1. Przygotuj blok egzosomu, zanurzając oczyszczoną próbkę egzosomu (uzyskaną z supernatantu hodowli komórek HCT116) w czystej mieszaninie do zatapiania o niskiej lepkości.
  2. Przeciąć blok egzosomu o grubości 60 nm przez ultramikrotom.
  3. Podwójne barwienie 2% octanem uranylu przez 20 min i cytrynianem ołowiu przez 10 min.
    W przypadku roztworu ołowiu Reynoldsa dodać 1,33 g azotanu ołowiu i 1,76 g cytrynianu sodu do łącznie 50 ml wody destylowanej.
  4. Obserwować siatkę pod transmisyjną mikroskopią elektronową przy napięciu 80 kV.
  5. Kliknij "Pobierz", a następnie kliknij "Plik" ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
UltramikrotomKsięga LeicaUniwersytet Kalifornijski (UCT
Octan uranyluEmsNumer katalogowy: 22400Niebezpieczna substancja chemiczna
Cytrynian ołowiuEmsNumer katalogowy: 17900
Transmisyjna mikroskopia elektronowaHitachiH7600
Siatka niklowaEmsG200-Ni
Siatka miedzianaEmsG200-Cu
Transmisyjna mikroskopia elektronowaJEOL (o rany)JEM2200FS
) powiedział:

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Exosome SectioningTransmission Electron MicroscopyUranyl Acetate StainingLead Citrate StainingUltra microtome SectioningNickel Grid PreparationExosome Imaging ProtocolExosome Structural AnalysisTEM Sample PreparationExosome Visualization

Related Articles