Sekcje, barwienie i obrazowanie TEM osadzonych egzosomów: protokół do wizualizacji cech strukturalnych egzosomów za pomocą TEM

Streszczenie

Źródło: Jung, M. K. et al. Przygotowanie próbki i obrazowanie egzosomów za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej. J. Vis. Exp. (2018)

Ten film opisuje technikę przygotowania cienkiego odcinka osadzonych egzosomów. Sekcje te można następnie barwić i obrazować za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej (TEM) w celu zbadania cech strukturalnych egzosomów.

Protokół

1. Podział egzosomów na sekcje

1. Przygotuj blok egzosomu, zanurzając oczyszczoną próbkę egzosomu (uzyskaną z supernatantu hodowli komórek HCT116) w czystej mieszaninie do zatapiania o niskiej lepkości.
2. Przeciąć blok egzosomu o grubości 60 nm przez ultramikrotom.
3. Podwójne barwienie 2% octanem uranylu przez 20 min i cytrynianem ołowiu przez 10 min.
   W przypadku roztworu ołowiu Reynoldsa dodać 1,33 g azotanu ołowiu i 1,76 g cytrynianu sodu do łącznie 50 ml wody destylowanej.
4. Obserwować siatkę pod transmisyjną mikroskopią elektronową przy napięciu 80 kV.
5. Kliknij "Pobierz", a następnie kliknij "Plik" i "Zapisz jako" w systemie kamer CCD pod mikroskopem elektronowym przy napięciu 80 kV. Postępuj zgodnie z automatycznymi ustawieniami czasu ekspozycji.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Ultramikrotom	Księga Leica	Uniwersytet Kalifornijski (UCT
Octan uranylu	Ems	Numer katalogowy: 22400	Niebezpieczna substancja chemiczna
Cytrynian ołowiu	Ems	Numer katalogowy: 17900
Transmisyjna mikroskopia elektronowa	Hitachi	H7600
Siatka niklowa	Ems	G200-Ni
Siatka miedziana	Ems	G200-Cu
Transmisyjna mikroskopia elektronowa	JEOL (o rany)	JEM2200FS

) powiedział: