Ekstrakcja mięśni szkieletowych kończyn tylnych: procedura wycinania mięśni szkieletowych kończyn tylnych z modelu mysiego

Streszczenie

Źródło: Bonetto, A. et al. Mysz z rakiem okrężnicy 26 jako model do badania kacheksji nowotworowej. J. Vis. Exp. (2016)

W tym filmie opisujemy procedurę wycinania mięśni szkieletowych kończyn tylnych z modelu mysiego. Wycięte mięśnie mogą być przechowywane w niższych temperaturach do czasu dalszej analizy.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Wycięcie tkanek i narządów

UWAGA: Do wykorzystania tkanek w testach biochemicznych lub biologii molekularnej, zaplanuj zważenie każdego organu i tkanki i natychmiastowe umieszczenie fragmentu w wstępnie oznakowanych krioprobówkach. Błyskawiczne zamrożenie w ciekłym azocie i przechowywanie w temperaturze -80 °C.

1. Aby uniknąć zanieczyszczenia próbek tkanek sierścią, należy spryskać całe ciało 70% etanolem.
2. Umieść mysz na łóżku sekcyjnym w pozycji leżącej na plecach i wyciągnij kończynę pionowo, mocując stopę do podwyższonego zacisku biurety.
3. Chwyć skórę kończyny dolnej za pomocą kleszczy Dumonta i użyj zakrzywionych cienkich nożyczek, aby delikatnie usunąć skórę i powięź, odsłaniając leżące pod spodem mięśnie brzucha kończyny dolnej.
4. Zidentyfikuj mięsień brzuchaty łydki na tylnej kończynie dolnej na podstawie jego pochodzenia w kłykciach bocznych i przyśrodkowych na tylnej kości udowej oraz jego przyczepu do kości piętowej przez ścięgno piętowe.
   1. Przystąp do przecięcia ścięgna piętowego łydki. Chwyć dystalny koniec mięśnia brzuchatego łydki kleszczami Dumonta i pociągnij brzuch mięśniowy w kierunku jego początku. Za pomocą nożyczek przetnij mięsień u źródła jak najbliżej kości udowej. Umieść mięsień w naczyniu. Natychmiast odważyć i zamrozić w probówce w ciekłym azocie.
      nuta: Pamiętaj, aby nie wycinać mięśnia płaszczkowatego wraz z mięśniem brzuchatym łydki. W takim przypadku ostrożnie usuń płaszczkowaty, delikatnie ściągając go kleszczami.
5. Przystąp do identyfikacji i wycięcia mięśnia piszczelowego przedniego od jego początku na przednio-bocznej powierzchni kości piszczelowej i jego przyczepu do przyśrodkowego pisma klinowego przez dystalne ścięgno.
   1. Aby uzyskać dźwignię, przytrzymaj stopę, chwytając cyfry palcem wskazującym i kciukiem. Włóż końcówkę kleszczy Dumonta bezpośrednio pod powierzchowne dystalne ścięgno kości piszczelowej i przesuń kleszcze tak, aby strona mogła być użyta do odłączenia brzucha mięśnia piszczelowego od leżącej poniżej tkanki łącznej.
   2. Przetnij dystalne ścięgno za pomocą cienkich zakrzywionych nożyczek, a następnie przetnij mięsień u początku jak najbliżej kości piszczelowej.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Myszy CD2F1	Harlan	60
Aparat anestezjologiczny	Znieczulenie EZ-Anesthesia	EZ-7000
Paź	Tka tkankowa	Numer katalogowy: 4583
Kriostat	Księga Leica	Zobacz materiał CM1850
Krążki korkowe	Nauki o mikroskopii elektronowej	Numer katalogowy: 63305
Mikrotainer (mikrotainer)	Bd	365873
Zjeżdżalnie szklane Superfrost plus	Firma VWR	Numer telefonu 48311-703
Streptomycyna-penicylina	Komórka	30-002-CI

Rozdział