Izolacja komórek jednojądrzastych Lamina Propria: technika wirowania w gradiencie gęstości na bazie krzemionki w celu uzyskania komórek jednojądrzastych z mysiej okrężnicy

Streszczenie

Źródło: McManus, D. et al. Izolacja komórek jednojądrzastych blaszki właściwej z jeliżówki myszy za pomocą kolagenazy E. J. Vis. Exp. (2019 rok)

W tym filmie pokazujemy izolację komórek jednojądrzastych blaszki właściwej z tkanki okrężnicy myszy poprzez trawienie enzymatyczne przy użyciu kolagenazy E i separacji gradientowej mediów do separacji gęstości opartej na krzemionce. Wyizolowane komórki jednojądrzaste można wykorzystać do dalszej analizy.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowanie roztworów

1. Jak opisano w Tabeli 1, przygotuj bufor dwukropek, pożywkę do separacji gęstości na bazie krzemionki 100%, pożywkę do separacji gęstości na bazie krzemionki 66%, pożywkę do separacji gęstości na bazie krzemionki 44%, bufor do mineralizacji kolagenazy E i bufor FACS.
   1. Przygotuj bufor jelita grubego dzień przed zabiegiem i przechowuj go przez noc w temperaturze 4 °C.
   2. Dzień przed z....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Szalka Petriego 60 mm	Thermo Scientific	150288
1x PBS (Biblioteka PBS)	Corning	21-040-CV
10 kanałów PBS	Lonza BioWhittaker	BW17-517Q
Jednorazowa pipeta serologiczna 10 ml	Corning	Numer katalogowy 4100
Strzykawka 10 ml	Becton Dickinson	302995
15 ml niesterylne probówki stożkowe	TruLine	TR2002
18 g igła	Becton Dickinson	Numer katalogowy: 305180
Jednorazowa pipeta serologiczna 25 ml	Corning	4250
Sitko do komórek o wielkości porów 40 μm	Corning	Numer telefonu 352340
50 ml probówki Falcon	Corning	21008-951
Albumina surowicy bydlęcej (BSA)	Sigma	A4503-1KG
Bufor fiksacyjny	Legenda biologiczna	420801
E. coli Kolagenaza E z Clostridium histolyticum	Sigma	Zobacz materiał C2139
EDTA, 0,5 M sterylny roztwór	Amresco (angielski)	E177-500ML
Surowica bydlęca płodu	Thermo /Fisher Scientific -HyCLone	SV30014.03
HEPESY	GE Healthcare-HyClone	SH30237.01
Percoll	GE Healthcare-Nauki Przyrodnicze	1708901
Średnie prędkości obrotowe	Corning	17-105-CV
Azydek sodu	VWR Life Science Amresco	Numer katalogowy: 97064-646
Błękit trypanowy	Lonza BioWhittaker	17-942E

szt. powiedział: powiedział: szt. TGL powiedział: