$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Pobieranie rdzenia kręgowego
- Poddaj mysz eutanazji za pomocą komory CO2. Unikaj zwichnięcia szyjki macicy, ponieważ może to spowodować uszkodzenie korzeni zwojowych z powodu sił ścinających. Od tego momentu wykonuj wszystkie kroki w sterylnych warunkach.
- Namocz zwierzę w 70% etanolu. Ten krok jest ważny dla sterylizacji i zapobiegania przeciąganiu się włosów przez narządy wewnętrzne.
- Pozostaw mysz do wyschnięcia z etanolu. Zapobiegaj jakiemukolwiek kontaktowi etanolu z narządami wewnętrznymi z powodu neurotoksyczności.
- Po wysuszeniu myszy ustaw ją za pomocą szpilek w pozycji leżącej (twarzą do dołu). Umieść szpilki na każdej kończynie tylnej i przedniej.
- Za pomocą kleszczy wykonaj nacięcie w linii środkowej rozciągające się czaszkowo-ogonowo od tylnej szyi do odcinka lędźwiowego kręgosłupa. Następnie podnieś płaty skórne obustronnie za pomocą kleszczy i odsłoń tkankę podskórną.
- Dotykaj czaszki myszy aż do osiągnięcia połączenia czaszkowo-szyjnego. Za pomocą nożyczek prostopadłych do zwierzęcia przeciąć mięśnie szyjki macicy i kręgosłup na skrzyżowaniu czaszkowo-szyjnym (7.kręg szyjny), używając ciężkich kleszczy. Wypreparuj kręgosłup doogonowo i wytnij kręgosłup ciężkimi kleszczami, aż osiągnie poziom lędźwiowy (poziom kończyn tylnych).
- Wykonaj pełną transsekcję ogonową na poziomie odcinka lędźwiowego kręgosłupa (5. kręg lędźwiowy) za pomocą ciężkich kleszczy.
- Najedź myszą (stroną do góry). Nie ma potrzeby zakrywania nacięcia, ponieważ DRG jest ekstrahowany z dolnych poziomów kręgów, a nie z szyjki macicy.
- Przeciąć w linii środkowej od szyi do brzucha, cofnąć skórę na boki, a następnie przeciąć, aby otworzyć otrzewną.
- Usuń narządy wewnętrzne wewnątrz otrzewnej (wątroba, śledziona, trzustka, żołądek i jelito) en bloc. Następnie należy usunąć narządy zaotrzewnowe (tj. nerki i trzustkę). Czaszkowo otwórz ścianę klatki piersiowej.
- Za pomocą kleszczy i ostrza chirurgicznego przetnij żebra, pozostawiając 5 mm żeber obustronnie od kręgosłupa. W tym momencie kręgosłup jest oddzielony od reszty ciała.
- Dwukrotnie przemyć kręgosłup z krwi zimną (4 °C) świeżą solą fizjologiczną buforowaną fosforanami (PBS).