Ksenografacja guza pochodząca od pacjenta: technika generowania eksperymentalnego modelu myszy do oceny raka urotelialnego

Streszczenie

Źródło: Moret, R. et al. Modele ksenoprzeszczepów ortotopowych pobrane od pacjentów dla wzrostu ludzkiego raka urotelialnego i raka jelita grubego oraz spontanicznych przerzutów. J. Vis. Exp. (2019 rok)

Ten film opisuje procedurę generowania eksperymentalnego modelu mysiego ksenoprzeszczepu, który może być wykorzystany do badania progresji raka urotelialnokomórkowego.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Model myszy UCC

1. Przygotowanie myszy do zabiegu
   1. Uzyskaj 6- do 8-tygodniową samicę myszy NOD/SCID. Ogol dolną część pleców myszy za pomocą kremu do depilacji. Znieczulij mysz w komorze indukcyjnej izofluranem (2,5% w 100% tlenu, 1 l/min).
   2. Po podaniu środków uspokajających umieść mysz w pozycji leżącej z pyskiem w stożku nosowym z izofluranu i na oklep mocno uziemioną na elektrodzie dyspersyjnej.
      UWAGA: Mysz jest całkowicie uspokojona, jeśli nie reaguje na szczypanie palców.
2. Weź pobrane komórki nowotworowe UCC i zawieś je ponownie w pożywce o pojemności 50 μl RPMI. Wkroplić komórki UCC do pęcherza moczowego za pomocą angiocewnika (ryc. 1Aa, Ab).
   1. Ustaw monopolarną maszynę do elektrokoagulacji i ustaw ją na moc 4 W. Nasmaruj sterylny angiocewnik 24 G galaretką smarującą i wprowadź go przez cewkę moczową samicy myszy.
      UWAGA: Może być wyczuwalny lekki opór. Delikatnie popchnij do przodu lub wyjmij angiocewnik i powtórz czynność. Nie używaj siły. Jeśli cewnik wygina się przy wejściu, włóż sterylny drut prowadzący do połowy do cewnika, aby zapewnić stabilność.
   2. Całkowicie włóż prosty drut prowadzący z rdzeniem stałym 0,025" 1 mm za końcem angioctiwa.
      UWAGA: Drut jest oznaczony taśmą przed zabiegiem, aby wskazać punkt zatrzymania 1 mm i zapewnić spójność.
   3. Przytrzymaj kołek monopolarny do prowadnika przez 1 s, co pozwala na elektryczne podrażnienie błony śluzowej pęcherza.
   4. Podłączyć świeży sterylny angiocewnik do strzykawki Luer-Lok o pojemności 1 ml i pobrać 200 μl pobranych komórek.
      UWAGA: Co najmniej 100 μl jest tracone z angiocewnika do strzykawki. Kompensuj objętość strat podczas obliczania potrzebnej objętości zawiesiny komórek.
   5. Usuń prowadnik i angiocewnik z cewki moczowej myszy. Wprowadzić angiocewnik ze strzykawką z komórkami podłączonymi do cewki moczowej.
      UWAGA: Awans powinien być łatwiejszy niż wcześniej.
   6. Wkropl 50 μl komórek do pęcherza myszy. Odczekaj kilka sekund przed usunięciem angiocewnika, aby komórki przylgnęły do ściany pęcherza.
      UWAGA: Komórki pozostają w pęcherzu moczowym i przekształcają się w guz pierwotny.

Wyniki

Rysunek 1: Ortotopowe modele myszy UCC. Panie przewodniczący, panie i panowie! Angiocewnik został wprowadzony do pęcherza moczowego samicy myszy NOD/SCID, a wstrząs elektrokoagulacyjny został nałożony na ścianę pęcherza moczowego za pomocą prowadnika. Panie przewodniczący, panie i panowie! Komórki nowotworowe UCC znakowane lucyferazyą, BlCaPt15 (2 x 10⁴ k...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Krem do depilacji	Kościół & Dwight Co., Inc	1(800)248-8820
Izofluran	Henry Schein Zdrowie zwierząt	108333
6-8 tygodniowe myszy NOD/SCID (samica)	Laboratorium Jacksona	1303
Kleszcze	Symetria chirurgiczna Inc	Numer katalogowy: 06-0011
Generator elektrochirurgiczny	Laboratorium Doliny	FORCE1C20
Komora indukcyjna izofluranu	Perkin Elmer	119038

szt.