Przygotowanie pozbawionej komórek nerki szczura: procedura generowania bezkomórkowego unaczynionego rusztowania całego narządu z pobranej nerki szczura

Streszczenie

Źródło: Kim, E. H. et al. Przygotowanie bezkomórkowych rusztowań nerkowych u szczurów. J. Vis. Exp. (2021)

Ten film opisuje przygotowanie pozbawionej komórek nerki szczura. Uzyskane bezkomórkowe rusztowanie naczyniowe może posłużyć jako obiecująca platforma do inżynierii tkankowej przeszczepów narządowych.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Pobieranie nerek i decelularyzacja

1. Zbierz lewą nerkę z aortą brzuszną i żyłą główną dolną.
2. Podwiązać moczowód, aortę piersiową, żyłę główną górną i gałęzie aorty brzusznej.
3. Utrzymuj narząd nawodniony w PBS (DPBS) firmy Dulbecco na 10-centymetrowej szalce Petriego.
4. Kankaniul aortę brzuszną i żyłę główną dolną za pomocą cewnika 23G. Aby usunąć resztki krwi, podłącz kaniulę do pompy perystaltycznej i przemyj DPBS (500 ml) i 16 U/ml heparyny przez 90 minut z szybkością 5 obr./min w temperaturze 37 °C.
5. Aby usunąć komórkowość nerki, należy perfundować nerkę 1% Triton X-100 (1 l) przez 3 godziny, a następnie 0,75% roztworem dodecylosiarczanu sodu (SDS) (2 l) przez 6 godzin pod stałym ciśnieniem 40 mmHg,
   nuta: Nerka stanie się przezroczysta po 8 godzinach.
6. Aby usunąć pozostałości SDS, należy perfuzjować próbkę z 1% penicyliną w wodzie destylowanej (6 l) przez 18 godzin (przez noc), a następnie sterylnym DPBS (500 ml) i heparyną 16 U/ml przez 90 minut.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Rurki z polietylenu 50, rurki cewnika 100 stóp	Naukowe drzewo mózgów	.023" × .038"
3-0 Jedwabna szpula dostępu / podwiązania naczyniowego u szczura	Naukowe drzewo mózgów	SUT-S 110
Cienkie nożyczki do cięcia powięzi / tkanki łącznej	Narzędzia naukowe	Numer katalogowy: 14058-09
Igła prowadząca 25 cali (do cewników naczyniowych)	Becton Dickinson	305145
Zaciski naczyniowe Schwartz microserrefine	Narzędzia naukowe	18052-01 (prosty)
5-0 Jedwabna szpula dostępu / podwiązania naczyniowego u myszy	Naukowe drzewo mózgów	SUT-S 106