Model organoidów guza pęcherza moczowego: metoda ortotopowego przeszczepu organoidów pęcherza moczowego do mysiego pęcherza biorcy

Streszczenie

Źródło: Kim, Y. et al. Hodowla, manipulacja i ortotopowe przeszczepy organoidów guza pęcherza moczowego myszy.J. Vis. Exp.(2020)

W tym filmie opisujemy ortotopową transplantację hodowanych organoidów guza pęcherza moczowego do mysiego pęcherza moczowego, aby zbadać rolę środowiska narządu w rozwoju nowotworów.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Organoidy guza pęcherza moczowego subkultury
 

UWAGA: Zaleca się przejście organoidów guza pęcherza moczowego, gdy osiągną średnicę 100–150 μm.

1. Dodać 500 μl kolagenazy/dypazy do podłoża organoidowego w 24-dołkowej płytce z organoidami nowotworowymi. Pipetować w górę i w dół matrycy błony podstawnej i pożywki. Inkubować przez 20 minut w temperaturze 37 °C i zebrać komórki do probówki o pojemnośc....

Wyniki

Rycina 1: Ortotopowy przeszczep organoidów guza pęcherza moczowego.(A) Schemat ideowy ortotopowego przeszczepu organoidów guza pęcherza moczowego do nagiej myszy. (B) Reprezentatywne obrazy pęcherzy moczowych i wycinków barwionych H&E od myszy ortotopowo przeszczepionych z organoidami guza pęcherza moczowego. Powiększone widoki obszarów ramkowyc.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Rurka stożkowa 15 ml	Spl	Numer katalogowy: 50015
Płytka 24-dołkowa	Corning	3526
Strzykawka insulinowa 29 G 1/2	SHINA	B299473538
Probówka stożkowa 50 ml	Spl	Numer katalogowy 50050
A8301	Tocris powiedział:	Numer katalogowy: 2939	Stężenie kolby: 25 mM
Alkohol etylowy	Daejung powiedział:	Numer telefonu 4023-2304
Szew wchłanialny	Henryk Schein	Numer katalogowy: 039010
Zaawansowany DMEM/F-12	Thermo	12634028
CAnN.Cg-Foxn1nu/Crl (naga mysz)	Rzeka Karola	Rozdział 194
Kolagenaza typu I	Thermo	17100017	Stężenie podstawowe: 20 mg/ml
Kolagenaza typu II	Thermo	17100015	Stężenie podstawowe: 20 mg/ml
Kolagenaza/dypaza	Sigma	10269638001	Stężenie podstawowe: 1 mg/ml
DMEM (zmodyfikowane minimalne niezbędne media firmy Dulbecco)	Gibco (firma Gibco)	Lata 11965-118
DMSO (sulcotlenek dimetylu)	Sigma	Zobacz materiał D8418
DPBS (sól fizjologiczna buforowana fosforanami firmy Dulbecco)	Welgene	LB 001-02
Zredukowany czynnik wzrostu Matrigel (GFR) Obniżony czynnik wzrostu (GFR)	Corning	Numer telefonu 354230	Stosować do hodowli organoidów na płytce
Matrigel o wysokim stężeniu (HC)	Corning	354248	Służy do przeszczepu organoidów
Mikroprobówka 1,5 ml	Axygen (Axigen	MCT-150-C
żyletka
Bufor soli fizjologicznej	JW Farmaceutyczny
Trypsyna-EDTA (0,25%)	Gibco (firma Gibco)	25200072
Probówka do ultrawirowania	Beckman Coulter	331372
Dichlorowodorek Y-27632	Abmole	Zobacz materiał M1817	Stężenie zapasów: 10 mM

TGL powiedział: ) powiedział: