Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
2.9K wyświetleń
⸱
30 kwietnia 2023
Źródło: Małysz, J. et al. Przygotowanie i wykorzystanie świeżo wyizolowanych komórek mięśni gładkich ludzkiego wypieracza do charakterystyki prądów kationowych wrażliwych na 9-fenantrol. J. Vis. Exp. (2020)
W tym filmie pokazujemy izolację komórek mięśni gładkich wypieracza z próbek ludzkiego pęcherza moczowego za pomocą dwuetapowej sekwencyjnej obróbki enzymatycznej.
Wszystkie procedury z udziałem ludzi zostały przeprowadzone zgodnie z instytucjonalnymi, krajowymi i międzynarodowymi wytycznymi dotyczącymi dobrobytu ludzi i zostały sprawdzone przez lokalną komisję rewizyjną instytucji.
1. Rozwarstwienie tkanek DSM i przygotowanie kawałków DSM wolnych od błony śluzowej
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Rycina 1: Podsumowanie etapów rozwarstwiania prowadzących do przygotowania fragmentów i konfiguracji mięśni gładkich wypieracza (DSM) stosowanych do dysocjacji enzymatycznej. Pokazane są obrazy: (A) próbki ludzkiego pęcherza moczowego o pełnej grubości dostarczonej z operacji na otwartym pęcherzu moczowym jako obcy materiał chirurgiczny w lodowatym DS, (B)
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 5 ml polistyrenowej rurki okrągłodennej | sokół | 352054 | Probówki do DS zawierające enzymy stosowane na etapach trawienia |
| Analogowy mikser wirowy | Firma VWR | Nr kat. 58816-121 | |
| Albumina surowicy bydlęcej | Sigma-Aldrich | A7906 | Ds |
| Chlorek wapnia | Sigma-Aldrich | Zobacz materiał C1016 | Roztwór zewnątrzkomórkowy i DS |
| EGTA (EGTA) | Sigma-Aldrich | E3889 | Chelator Ca2+, stosowany w wewnątrzkomórkowym roztworze pipet |
| glukoza | Sigma | Kontroler G8270 | |
| Kolagenaza typu 2 | Korporacja Biochemiczna Worthington | LS004177 | DS-C |
| Hydrat wodorotlenku cezu | Sigma-Aldrich | Zobacz materiał C8518 | Roztwór do pipet wewnątrzkomórkowych |
| CsCl | Sigma-Aldrich | 203025 | Roztwory zewnątrzkomórkowe i wewnątrzkomórkowe |
| DL-ditiotreitol (DDT) | Sigma-Aldrich | Zobacz materiał D9779 | Środki redukujące stosowane razem z papainą |
| NaOH | Sigma-Aldrich | Zobacz materiał S8045 | |
| Nifedypina | Sigma-Aldrich | N7634 | Bloker kanałów Ca2+ bramkowany napięciem typu L |
| Pływający stojak/uchwyt na rurki piankowe | Firma VWR Scientific | 82017-634 | Służy do trzymania probówek z enzymami do kontroli temperatury |
| Kwas glutaminowy (sól Na) | Sigma-Aldrich | Zobacz materiał G1626 | Ds |
| papaina | Korporacja Biochemiczna Worthington | LS003126 | DS-P (Amerykański Inspektor ds-P) |
| MgCl2 (sześciowodny) | Sigma-Aldrich | Zobacz materiał M2670 | Roztwory zewnątrzkomórkowe i wewnątrzkomórkowe |
| Kcl | Fisher Naukowy | Zobacz materiał BP366-1 | Roztwór zewnątrzkomórkowy |
| Zawartość NaCl | Sigma-Aldrich | Zobacz materiał S7653 | Roztwory zewnątrzkomórkowe i wewnątrzkomórkowe |
| Niemetalowa igła strzykawkowa, MicroFil | Wskaźnik WPI | MF-34G-5 | Napełnianie roztworu pipet wewnątrzkomórkowych |
| Pipeta Pasteura | Marka rybacka | 13-678-20A | Końcówki są odłamywane i polerowane ogniowo i używane do miareczkowania tkanek poddanych działaniu enzymatycznym w celu uwolnienia pojedynczych komórek DSM z kawałków |
| HEPESY | Sigma-Aldrich | H3375 | Bufor pH |
| Łaźnia wodna z wytrząsaniem Thermo Scientific Precision (model 2870) | Thermo Scientific | Przerwać | Łaźnia wodna do kontroli temperatury trawienia enzymatycznego stosowana jako alternatywa dla kąpieli w komorze tkankowej |
| Rurki winylowe | ColePalmer | Numer katalogowy: 06405-3 | Wiele zastosowań, w tym do łączenia kąpieli tkankowej z kąpielą z obiegową wodą |
| Wanna cyrkulacyjna wody, Haake D1 L | Haake powiedział: | Przerwać | Połączony z kąpielą tkankową |
| Mikroskop odwrócony ZeissAxiovert 40C z obiektywami 10x i 40x | Carl-Zeiss | Przerwać | Część zestawu z zaciskiem krosowym |
