Artykuł metodologiczny

Enkapsulacja siRNA do egzosomów za pomocą elektroporacji: technika oparta na impulsach elektrycznych do ładowania siRNA do egzosomów

30 kwietnia 2023

W tym artykule

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Faruqu, F. N. et al. Przygotowanie egzosomów do dostarczania siRNA do komórek nowotworowych. J. Vis. Exp. (2018)

Ten film opisuje metodę opartą na elektroporacji do enkapsulacji siRNA do egzosomów. Egzosomy załadowane siRNA mogą być następnie wykorzystywane do zastosowań terapeutycznych.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Enkapsulacja siRNA do egzosomów za pomocą elektroporacji

  1. Wstępnie schłodzić kuwetę do elektroporacji (patrz tabela materiałów) na lodzie przez 30 minut przed elektroporacją.
  2. Wymieszaj 7,0 μg egzosomów (32 μl z 7 x 1012 p/ml zapasu w PBS) z 0,33 μg siRNA (12 μL z 2 μM zapasu w wodzie wolnej od RNaz) w probówce mikrowirówkowej. Uzupełnić objętość do 150 μl buforem kwasu cytrynowego (patrz tabela materiałów). Stosunek molowy egzosomu do siRNA wynosi w tym przypadku 1:60.
  3. Przenieść mieszaninę do kuwety do elektroporacji. Zakręć kuwetę i umieść ją w uchwycie kuwety elektroporatora (patrz Tabela materiałów). Obróć pokrętło obrotowe o 180° zgodnie z ruchem wskazówek zegara.
    nuta: Koło musi być całkowicie obrócone do pozycji zablokowanej, aby kuweta zetknęła się z elektrodami.
  4. Wybierz żądany program elektroporacji (np. X-01, X-05, A-20, T-20, T-30 itd.) i rozpocznij elektroporację, naciskając przycisk start.
    nuta: Pomyślny impuls jest sygnalizowany wyświetleniem "OK" na wyświetlaczu.
  5. Po elektroporowaniu wyjmij kuwetę po obróceniu koła o 180° w kierunku przeciwnym do ruchu wskazówek zegara. Pobrać próbkę z kuwety za pomocą plastikowej pipety w celu dalszego przetwarzania.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Atto655-siRNAEurogentecSQ-SIRNA(Oznakowane-S) UGC-GCU-ACGAUC-GAC-GAU-G55; (Bez oznaczenia) CAU-CGU-CGA-UCG-UAGCGC-A55.
Pipety szklaneFisher NaukowyNumer katalogowy: 1156-6963
Amaxa Nucleofector ILonzaJądro Jądro IZ zestawami Nucleofector firmy Amaxa
Bufor kwasu cytrynowego z EDTAWymieszaj 0,1954 g kwasu cytrynowego i 0,2087 g fosforanu disodowego w 50 ml wody dejonizowanej. Dodaj EDTA do 0,1 mM. Dostosuj pH do 4,4.
Rurki do mikrofugeStarlab (Laboratorium Starlab)S1615-5500Pojemność 1,5 ml
powiedział:

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

adowanie egzosom wtechnika elektroporacjidostarczanie siRNAb ona egzosom wimpulsy elektrycznezastosowania terapeutycznewyciszanie gen wizolacja egzosom wegzosomy siRNA

Powiązane artykuły