Method Article

Izolacja komórek jednojądrzastych z mózgu myszy: technika wirowania w gradimencie gęstości do izolowania komórek jednojądrzastych rezydujących w mózgu

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Ji, Z. et al. Analiza cytometryczna przepływu nacieków limfocytów w ośrodkowym układzie nerwowym podczas eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia. J. Vis. Exp. (2020)

W tym filmie przeprowadzamy izolację komórek jednojądrzastych z mózgu myszy za pomocą wirowania gradientu gęstości. Wyizolowaną zawiesinę komórek jednojądrzastych można wykorzystać do dalszej analizy.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowanie zawiesiny pojedynczej komórki z mózgu

  1. Rozcieńczyć podłoże o gradiencie gęstości w stosunku 9:1 z PBS w stożkowej probówce o pojemności 15 ml, aby uzyskać końcowy 100% roztwór.
  2. Znieczulenie myszy w szczycie EAE za pomocą dootrzewnowego wstrzyknięcia 1% pentobarbitalu sodu (50 mg / kg) i perfuzję dosercową za pomocą 20 ml sterylnego, lodowatego PBS. Osiągnij to, powoli i równomiernie wstrzykując PBS do lewej komory ser....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Rysunek 1: Schemat układu gradientu Percoll do izolacji komórek jednojądrzastych.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Homogenizator odbityWheaton353107542
PercollGeNumer katalogowy: 17-0891-01
powiedział:

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Mononuclear Cell IsolationDensity Gradient CentrifugationBrain Resident CellsLymphocyte InfiltrationTissue HomogenizationCell Pellet FormationInterface Layer CollectionMyelin RemovalRPMI MediumBasement Membrane Matrix

Related Articles