Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Znieczulenie i kaniulacja tchawicy
- Zważ mysz, aby określić dawkę leków znieczulających, pooperacyjnych leków przeciwbólowych i objętość oddechową respiratora. Podgrzej poduszkę grzewczą w temperaturze 37 °C. Układ chirurgiczny przedstawiono na rycinie 1.
- Wstrzyknąć myszu dootrzewnowo mieszaninę ketaminy i ksylazyny w dawce odpowiednio 80 mg/kg i 10 mg/kg.
- Szybko ogol futro myszy na gardle i lewej stronie klatki piersiowej za pomocą elektrycznej maszynki do golenia.
- Sprawdź głębokość znieczulenia, ściskając ogon i/lub tylne łapy i ułóż zwierzę w pozycji leżącej na poduszce grzewczej. Umieść mały kompres z gazy pod głową zwierzęcia, aby uniknąć przegrzania oczu. Nałóż żel do oczu, aby uniknąć suchości oczu.
- Zabezpiecz cztery kończyny taśmą samoprzylepną na powierzchni poduszki grzewczej. Przełóż pętlę jedwabnego szwu 5-0 pod górnymi siekaczami i przyklej koniec pętli taśmą klejącą do poduszki grzewczej. Dzięki temu pysk zwierzęcia będzie otwarty i ułatwi kaniulację.
- Nałóż krem do depilacji na wcześniej ogolone miejsca i delikatnie masuj bawełnianym wacikiem przez 1 min. Nadmiar sierści i kremu przetrzyj gazą. Użyj kropli 0,9% roztworu soli fizjologicznej i gazy, aby oczyścić miejsca nacięć. Nałóż kawałki sterylnej gazy na ogolone gardło i klatkę piersiową i namocz je w jodopowidon.
nuta: Zalecamy zastosowanie leku znieczulającego miejscowo (lidokainy lub bupiwakainy) na miejsca nacięć.
- Ustaw wentylator na objętość oddechową 7 ml/kg i szybkość wentylacji 140 uderzeń/min.
nuta: Od teraz pracuj pod mikroskopem stereoskopowym mikrochirurgii.
- Przytrzymaj skórę na środku gardła i wykonaj nacięcie 0,5 cm wzdłuż linii ogonowej/głowowej za pomocą małych nożyczek. Oddziel płaty gruczołu ślinowego, a następnie delikatnie oddziel powięź mięśnia mostkowo-gnykowego zakrzywionymi kleszczami preparacyjnymi, aż do wyświetlenia krtani i tchawicy. Zabezpiecz krawędzie otworu za pomocą zwijaczy przymocowanych do elastycznych taśm.
nuta: Wykonaj ten krok bez nacinania mięśni. Przeszkolony operator będzie mógł zaintubować zwierzę przez jamę ustną bez wizualizacji tchawicy, co czyni ten krok opcjonalnym.
- Trzymaj delikatnie język na boki. Za pomocą kleszczy włóż igłę wewnętrzną kaniuli 16 G do tchawicy. Wizualizuj prawidłowe wprowadzenie do tchawicy przez nacięcie gardła.
- Podłącz kaniulę do wentylatora i zapewnij prawidłową wentylację, umieszczając rurkę wydechową w wodzie. Obecność pęcherzyków wskazuje na prawidłową intubację.
nuta: Aby tkanki były mokre podczas operacji, na nacięciu gardła należy przyłożyć sterylną gazę nasączoną 0,9% roztworem soli fizjologicznej i jodopowidonem. Kontroluj wilgotność podczas zabiegu.
2. Podwiązanie tętnicy wieńcowej LAD
- Zwolnij lewą przednią łapę z taśmy klejącej i ostrożnie przesuń mysz do prawej pozycji odleżynowa. Zabezpiecz lewą kończynę przednią, gdy zwierzę znajdzie się we właściwej pozycji.
- Zidentyfikuj linię między lewym mięśniem piersiowym mniejszym i większym i wykonaj ukośne nacięcie skóry na 1 cm nożyczkami podążając za linią. Za pomocą mikronożyczek preparujących oddziel powięź mięśni piersiowych bez nacięcia. Utrzymuj mięśnie piersiowe oddzielone retraktorami przymocowanymi do elastycznych taśm.
- Ustawić wentylator na dodatnie ciśnienie wydechowe (PEEP) 3 cm H2O.
- Otwórz jamę klatki piersiowej za pomocą kleszczy w 3. przestrzeni międzyżebrowej między 3. a 4. żebrem. Unikaj dotykania tętnicy piersiowej wewnętrznej ponieważ istnieje niebezpieczeństwo krwawienia. Nie dotykać serca ani płuc. Umieść dwa zwijacze w klatce piersiowej, po jednym na każdym żebrze (Rysunek 2A).
- Za pomocą zakrzywionych cienkich kleszczy ostrożnie usuń osierdzie i rozsuń je, nie uszkadzając serca i płuc.
- Zlokalizuj lewą przednią zstępującą (LAD) tętnicę wieńcową. Tętnica LAD pojawia się jako powierzchowna, jaskrawoczerwona linia biegnąca od krawędzi lewej małżowiny usznej w kierunku wierzchołka.
- Użyj uchwytu na igłę, aby wprowadzić jedwabny szew 7-0 pod LAD 2 do 3 mm poniżej lewego przedsionka. Pociągnij jedwab powoli, aby uniknąć rozdarcia tkanki serca. Zawiąż ligaturę trzema węzłami. Dolna lewa część lewej komory natychmiast zblednie po podwiązaniu (ryc. 2B–E).
nuta: Ważne jest, aby nie wchodzić zbyt głęboko w jamę komorową ani nie pozostawać zbyt powierzchownym. W przypadku zwierząt operowanych pozorowanie, przeciągnij jedwab do szwów pod LAD i zdejmuj go powoli, unikając rozerwania tkanki.
- Zwolnij zwijacze żeber, przytrzymaj 3. żebro kleszczami i wykonaj dwa przejścia z jedwabnym szwem 6-0 pod 3. i 4. żeber.
ostrożność: Nie należy perforować serca ani płuc. Nie zaciskaj jeszcze węzłów.
- Umieść trzy krople 0,9% roztworu soli fizjologicznej o temperaturze 37 °C na otwór i zamknij rurkę wydechową na 2 lub 3 cykle oddechowe, aby prawidłowo napompować płuca. Zaciśnij szew i zabezpiecz dwoma rzutami.
- Zwolnij retraktory trzymające mięśnie i pomóż im odzyskać właściwe miejsce.
- Zamknij skórę klatki piersiowej dwoma szwami z jedwabiu 5-0 i zabezpiecz dwoma rzutami. Zamknij skórę gardła jednym szwem z jedwabiu do szwów 5-0 i zabezpiecz dwoma rzutami.
