Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE
1. Chirurgiczne wszczepienie telemetrycznego systemu monitorowania temperatury
- Po przybyciu od sprzedawcy pozwól zwierzętom odpocząć w wiwarium przez co najmniej 1 tydzień przed zabiegiem, aby zminimalizować stres związany z transportem.
- Myszy są trzymane w grupie (maksymalnie 5 sztuk na klatkę zgodnie z lokalnymi wytycznymi IACUC) do dnia operacji wszczepienia urządzenia telemetrycznego do temperatury. Umieść je w standardowych klatkach o wymiarach 7,25 cala (szer.) x 11,75 cala (dł.) x 5 cali (wys.) zawierających ściółkę z kolb kukurydzy. Utrzymuj cykl światła w cyklu świetlnym 12 x 12 (wł.: 7 rano; wył.: 7 wieczorem). Utrzymuj temperaturę obudowy na poziomie 20–22 °C, a wilgotność względną (wilgotność względną) na poziomie 30–60%. Zapewnij standardową dietę i wodę ad libitum do czasu protokołu EHS.
nuta: Uzasadnieniem dla indywidualnego trzymania jest uniknięcie częstych urazów podczas walki u samców myszy C57bl/6J i zapewnienie dużej ilości okazji do spontanicznego biegania po kole dla każdej myszy.
- W celu umieszczenia urządzeń telemetrycznych należy znieczulić mysz izofluranem (4%, 0,4–0,6 l/min przepływu O2) w komorze indukcyjnej. Następnie umieść mysz w ciągłym znieczuleniu za pomocą stożka nosowego (1,5%, 0,6 l/min).
- Używaj lubrykantu do oczu, takiego jak maść weterynaryjna, aby chronić oczy zwierzęcia przed uszkodzeniem lub obrażeniami podczas operacji.
- Aby przygotować miejsce operacji, ogol dolną część brzucha małymi maszynkami do strzyżenia włosów dla zwierząt lub użyj dostępnego w handlu środka do usuwania włosów. W tym czasie należy podać pierwszą dawkę buprenorfiny podskórnie (0,1 mg/kg).
- Wyszoruj obszar trzema płukaniami jodonu powidonu (lub podobnym peelingiem bakteriobójczym), a następnie spłucz 70% alkoholem izopropylowym (lub sterylną solą fizjologiczną, w zależności od lokalnych wymagań weterynaryjnych). Następnie przenieś mysz do obszaru operacyjnego.
- Użyj samoprzylepnej serwety, aby odizolować miejsce operacji na myszy. Za pomocą sterylnych narzędzi i techniki aseptycznej wykonaj nacięcie ~1 cm na linii środkowej wzdłuż linea alba, około 0,5 cm od brzegu żebrowego. Następnie oddziel skórę od warstwy mięśniowej i wykonaj nieco mniejsze nacięcie na kresie białej, uważając, aby nie uszkodzić jelit ani narządów wewnętrznych.
- Gdy warstwa mięśniowa jest otwarta, umieść sterylny telemetr (miniaturowe bezbateryjne urządzenie radiotelemetryczne wielokrotnego użytku; 16,5 x 6,5 mm) w jamie wewnątrzotrzewnowej przed tętnicami i żyłami ogonowymi oraz na grzbiecie narządów trawiennych, aby umożliwić mu swobodne unoszenie się.
nuta: Wszystkie telemetry są czyszczone wodą z mydłem, dokładnie płukane i sterylizowane gazem tlenkiem etylenu między użyciami. Jeśli sterylizacja gazowa nie jest dostępna, dopuszczalne jest zanurzenie w roztworach sterylizacyjnych (zgodnie z zaleceniami producenta dotyczącymi czasu rozcieńczania i zanurzenia) w celu dezynfekcji i sterylizacji telemetrów.
- Zamknij otwór brzuszny sterylnym szwem wchłanialnym 5-0 i zamknij skórę za pomocą prostego przerywanego szwu z szwem prolinowym 5-0.
nuta: Wykazano, że umożliwienie telemetrowi unoszenia się w komorze brzusznej bez przywiązywania go do ściany brzucha (metoda zalecana przez producenta) jest skuteczne i preferowane przez autorów w celu wyeliminowania nadmiernego napięcia w ścianie brzucha podczas gojenia. Co więcej, nie ma to wpływu na zdolność odbiornika do uzyskania sygnału z emitera.
- Umieść mysz w czystej klatce z przenośną poduszką grzewczą pod klatką. Monitoruj mysz co 15 minut przez pierwszą godzinę po wyzdrowieniu ze znieczulenia, a następnie wróć do pomieszczenia dla zwierząt.
