$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Protokół EHS
- W noc poprzedzającą protokół EHS umieść mysz w komorze środowiskowej o temperaturze pokojowej (~25 °C, ≈30% wilgotności względnej), aby zaaklimatyzować się w komorze.
- Użyj systemu gromadzenia danych, aby zebrać ciągłą temperaturę rdzenia (Tc), uśrednioną w odstępach 30 s przez noc.
- Rano w dniu protokołu BHP upewnij się, że mysz jest w normalnym zakresie temperatury dobowej lub poniżej niego przed zwiększeniem temperatury w komorze (tj. 36–37.5 °C). Dzięki temu mysz nie ma gorączki i nie doświadczyła w tym okresie nadmiernego stresu.
- Gdy mysz jest stabilna i znajdzie się w zakresie normalnej spoczynkowej temperatury rdzenia, usuń jedzenie i wodę i zważ zwierzę. Zamknij drzwi komory i zwiększ temperaturę komory do docelowego poziomu 37.5 °C i wilgotności względnej 40%–50% lub żądanej temperatury i wilgotności otoczenia. Sprawdź temperaturę i wilgotność w komorze za pomocą skalibrowanego monitora temperatury i wilgotności.
- Otocz komorę kurtyną zaciemniającą, aby zminimalizować światło i zakłócenia podczas protokołu. Monitoruj mysz w sposób ciągły podczas działania protokołu za pomocą zdalnych kamer oświetlonych podczerwienią. Ustaw ostrość drugą kamerę na monitorze temperatury i wilgotności, umieszczonym blisko koła jezdnego. Dokonaj wszelkich regulacji sterownika dla nastawy komory środowiskowej, aby zapewnić dokładne odczyty temperatury w pobliżu zwierzęcia.
- Gdy komora osiągnie temperaturę docelową zmierzoną przez drugą kamerę na monitorze temperatury (może to potrwać ~30 minut), szybko otwórz drzwi komory i umieść mysz w wymuszonym kole do pracy.
- Zainicjuj protokół wymuszonego koła biegowego przy prędkości 2.5 m/min i zwiększaj prędkość 0.3 m/min co 10 minut, aż mysz osiągnie Tc 41 °C. Gdy mysz osiągnie tę temperaturę rdzenia, pozwól, aby prędkość pozostała stała aż do wystąpienia objawów, charakteryzujących się pozorną utratą przytomności, upadkiem do tyłu lub omdleniem oraz niezdolnością do kontynuowania biegu lub trzymania się koła. Potwierdź ten punkt czasowy, gdy mysz wykona trzy ruchy do tyłu na kole bez oznak fizycznej reakcji. Alternatywnie, zidentyfikuj humanitarny punkt końcowy zgodnie z lokalnymi zasadami IACUC, aby określić, kiedy należy zatrzymać protokół (np. gdy Tc ~43 °C). Ten punkt końcowy jest nieco powyżej ograniczenia objawów u zasadniczo wszystkich myszy.
- Aby wykonać protokół szybkiego chłodzenia (R), gdy mysz osiągnie ograniczenie objawów, zatrzymaj kółko i natychmiast zdejmij je z wymuszonego koła do biegania. Zważ mysz i umieść ją z powrotem w klatce domowej, aby odzyskała sprawność w temperaturze pokojowej. W tym czasie pozostaw otwarte drzwi komory i przywróć nastawę inkubatora do temperatury pokojowej, aby komora szybko ostygła. Zabieg ten skutkuje >99% długoterminowym przeżyciem.